| RNA干扰沉默缺氧诱导因子-1α治疗骨肉瘤的实验研究 |
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| 作者姓名： | Wu Q Yang SH Ye SN Wang RY |
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| 作者单位： | 430022,武汉,华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科 |
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| 摘 要： | 目的 观察靶向缺氧诱导因子 (HIF)- 1α的短发夹状小干扰RNA基因转染对骨肉瘤生长的影响。方法 针对HIF- 1α构建短发夹状siRNA真核表达载体 (pSilencer) HIF并转染骨肉瘤细胞系(SaOS) 2。骨肉瘤细胞置于缺氧诱导培养基中培养。逆转录 聚合酶链反应 (RT -PCR)和免疫印迹沉淀观察HIF -1α的基因沉默效果。四甲基偶氮唑盐 (MTT)比色分析检测细胞体外增殖活力,透射电镜,原位末端标记TUNEL法,AnnexinV/PI双标记法检测细胞的凋亡。同时,通过裸鼠移植瘤模型观察HIF- 1α基因沉默后对骨肉瘤体内治疗效果。结果 测序证实成功构建HIF- 1α的短发夹状siRNA真核表达载体pSilencer HIF,转染骨肉瘤细胞后,HIF -1α基因表达显著抑制 ( 90% )。与对照组比较,pSilencer HIF转染组骨肉瘤细胞缺氧状态下的增殖活性显著降低。缺氧培养 72h后,透射电镜、TUNEL法显示细胞典型凋亡特征,AnnexinV/PI双标检测转染组细胞凋亡率为 18. 71% ±0. 98%,明显高于pSilencer neo空载体转染组和未转染组 (P< 0 .01 )。裸鼠移植瘤实验显示pSilencer HIF转染组肿瘤生长减慢,成瘤率下降,肿瘤组织中可见大量坏死组织。结论 靶向HIF- 1α基因的短发夹状siRNA可以有效阻断骨肉瘤缺氧耐受转导通路,抑制骨肉瘤细胞的生长。
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| 关 键 词： | HIF-1α 骨肉瘤细胞 转染 α基因 治疗 观察 靶向 RNA干扰 基因沉默 小干扰RNA |
Therapeutic effects of RNA interference targeting HIF-1 alpha gene on human osteosarcoma |
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| Wu Q,Yang SH,Ye SN,Wang RY.Therapeutic effects of RNA interference targeting HIF-1 alpha gene on human osteosarcoma[J].National Medical Journal of China,2005,85(6):409-413. |
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| Authors: | Wu Qiang Yang Shu-Hua Ye Shu-Nan Wang Rui-Ying |
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| Institution: | Department of Orthopaedic, Union Hospital, Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology, Wuhan 430022, China. |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Cell hypoxia RNA nuclear Osteosarcoma gene therapy |
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