| 双功能逆转录病毒载体介导耐药基因转染人脐血CD34+细胞能增强联合化疗抗性 |
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| 引用本文： | 王季石,陈子兴,夏学鸣,阮长耿,卢大儒,薛京伦.双功能逆转录病毒载体介导耐药基因转染人脐血CD34+细胞能增强联合化疗抗性[J].中华医学杂志(英文版),2001,114(1). |
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| 作者姓名： | 王季石 陈子兴 夏学鸣 阮长耿 卢大儒 薛京伦 |
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| 作者单位： | 1. 江苏省血液研究所苏州医学院附一院血液科苏州 215006
2. 复旦大学遗传学研究所上海 200433 |
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| 摘 要： | 目的 为探讨转染醛脱氢酶基因 (ALDH1)和多药耐药基因 (MDR1)的人脐血CD34 细胞能否同吮增强对活性环磷酰胺 ( 4 HC)和P gp转运泵靶药的抗性。方法 构建了同时含ALDH1和MDR1双耐药基因的逆转录病毒表达质粒G1Na ALDH1 IRES MDR1,经LipofectAMINE介导转染GP E86和PA317包装细胞 ,采用含长春新碱 (VCR)和 4 HC的培养基克隆选择后 ,收集重组病毒上清于单向型与双嗜型包装细胞行乒乓交互感染 ,获得PA317重组病毒生产细胞 (最高滴度达 5 6× 10 5CFU ml) ,将含ALDH1和MDR1耐药基因重组病毒上清在细胞生长因子刺激下重复感染人脐血CD34 细胞。结果 经PCR ,RT PCR ,Southernblot,Northernblot,FACS和MTT方法检测显示外源ALDH1与MDR1基因已经整合入转染靶细胞中基因组并获得有效表达 ,同时传递不同的耐药表型。经耐药基因修饰的脐血CD34 细胞对 4 HC和P gp转运泵靶药同时产生抗性 ,其IC50值分别比未转染细胞高 4倍 ( 4 HC) ,5 5倍 (柔红霉素 DNR)和 7 2倍 (VCR)。结论 双功能逆转录病毒载体介导两种不同耐药基因转染人脐血CD34 细胞能增强联合化疗抗性 ,本基因转移系统的建立为开展肿瘤基因治疗的临床研究奠定了实验基础。
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| 关 键 词： | 基因疗法 醛脱氢酶基因(ALDH1) 多药耐药基因(MDR1) 逆转录病毒载体 基因共表达 造血 干细胞 脐血 |
A bicistronic retroviral vector to introduce drug resistance genes into human umbilical cord blood CD34+ cells to improve combination chemotherapy tolerance |
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| WANG Jishi,CHEN Zixing,XIA Xueming,LU Daru,XUE Jinglun,RUAN Changgeng.A bicistronic retroviral vector to introduce drug resistance genes into human umbilical cord blood CD34+ cells to improve combination chemotherapy tolerance[J].Chinese Medical Journal,2001,114(1). |
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| Authors: | WANG Jishi CHEN Zixing XIA Xueming LU Daru XUE Jinglun RUAN Changgeng |
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| Keywords: | gene therapy aldehyde-dehydrogenase-class1gene (ALDH-1) multidrug resistance gene (MDR1) retrovirus vector gene co-expression hematopoietic stem cells cord blood |
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