应用载体介导的RNA干扰技术抑制肝癌细胞H-rasVal12的表达

目的观察载体介导的RNA干扰(RNAi)技术对肝癌细胞突变的H-rasVal12表达的抑制作用。方法将针对突变H-ras的短发夹RNA(shRNA)质粒表达载体转染肝癌细胞株BEL7402和SMMC7721,用免疫印迹(Western blot)法检测H-ras蛋白的表达,用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。计量资料比较采用t检验;计数资料比较采用χ2检验。结果 (1)转染前、后SMMC7721的H-ras蛋白表达量〔光密度值分别(1 752±21)和(1 736±28)〕比较,差异无统计学意义(t=0.474,P=0.646);而转染了H1-shRNA的BEL7402的H-ras蛋白表达量(920±11)与转染前(1 221±11)比较,差异有统计学意义(t=20.126,P<0.01);转染了H2-shRNA的BEL7402的H-ras蛋白表达量(872±10)与转染前(1 201±10)比较,差异有统计学意义(t=23.477,P<0.01)。H1-shRNA组和H2-shRNA组H-ras蛋白表达下调了62.8%和63.4%。(2)流式细胞仪检测表明,BEL7402转染H1-shRNA质粒后细胞凋亡率(47.7%)与转染H2-RNA质粒后细胞凋亡率(49.3%)比较,差异无统计学意义(χ2=0.005,P=0.94);但均高于BEL7402转染对照质粒后细胞凋亡率(30.2%),差异有统计学意义(χ2H1=6.810,P<0.01;χ2H2=6.103,P<0.01)。结论载体介导的RNAi技术可有效特异抑制肝癌细胞突变的H-rasVal12表达,对野生型的H-ras表达无影响。