条件性胰岛β细胞CASK基因敲除小鼠的构建及鉴定

目的：构建条件性胰岛β细胞钙/钙调蛋白依赖性丝氨酸蛋白激酶（calcium/calmodulin?dependent serine protein kinase，CASK）基因敲除小鼠，为研究CASK基因在糖尿病发生中的机制提供动物模型。方法：将CASKloxp/- 雌鼠与CASKloxp/Y雄鼠杂交，获得基因型为CASKloxp/loxp雌鼠、CASKloxp/Y雄鼠；再让条件性胰岛β细胞特异性表达Cre重组酶雄鼠与CASKloxp/loxp雌鼠杂交获得CASKloxP/YMIP?Cre雄鼠和CASKloxP/-MIP?Cre雌鼠。CASKloxP/YMIP?Cre基因型小鼠即为本实验所需要构建的模型小鼠。小鼠生后1~2周剪尾，通过PCR鉴定小鼠基因型，4~5周龄时腹腔注射他莫昔芬诱导Cre重组酶表达后，利用实时荧光定量PCR、蛋白质印迹技术验证CASK基因敲除效果。结果：从引进这两种小鼠开始，繁殖10个月，共获得基因型为CASKloxP/YMIP?Cre的雄鼠28只，PCR 结果证实小鼠基因型符合CASKloxP/YMIP?Cre。实时荧光定量PCR、蛋白质印迹结果显示CASKloxP/YMIP?Cre小鼠胰岛CASK表达量明显下降。结论：利用 Cre/loxp系统，成功构建了条件性胰岛β细胞CASK基因敲除小鼠，为在动物水平研究CASK基因在糖尿病发病机制中的作用提供了研究平台。