| 人类免疫缺陷病毒１型病毒复制负调控因子编码基因的克隆及在ＢＣＢＬ-１细胞和ＮＩＨ／３Ｔ３细胞中的表达 |
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| 引用本文： | 曹 戌,华立新,冯宁翰,李久明,吕志刚,秦 娣,卢 春.人类免疫缺陷病毒１型病毒复制负调控因子编码基因的克隆及在ＢＣＢＬ-１细胞和ＮＩＨ／３Ｔ３细胞中的表达[J].南京医科大学学报,2008,28(4):434-438444. |
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| 作者姓名： | 曹 戌 华立新 冯宁翰 李久明 吕志刚 秦 娣 卢 春 |
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| 作者单位： | [1]南京医科大学第一附属医院泌尿外科,江苏南京210029 [2]南京医科大学微生物学与免疫学系,江苏南京210029 |
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| 基金项目： | 霍英东教育基金高等院校青年教师基金
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江苏省高校自然科学基金 |
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| 摘 要： | 目的:分离克隆人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)编码的病毒复制负调控因子(Nagative factor,Nef)基因,并将其导入BCBL-I细胞和NIH/3T3细胞中进行表达.方法:根据GenBank登记的Nef基因核苷酸序列设计PCR引物,在其5'端分别引入EcoR I和Sal I酶切位点;以含有Nef基因的pCINL质粒为模板,扩增Nef基因,经双酶切后克隆进真核表达载体pCI-neo中.为了便于蛋白检测,在下游引物5'端引入Flag序列,构建重组真核表达质粒.重组质粒经酶切鉴定、核酸序列测定和分析后分别瞬时转染BCBL-I细胞和NIH/3T3细胞,用RT-PCR、Western blot分别从核酸和蛋白水平检测Nef基因的表达情况.结果:成功构建了含Nef基因的重组真核表达质粒,核酸序列分析显示,克隆的Nef基因序列全长651 bp,与GenBank中登记的Nef基因序列100%同源,引入的Flag序列完全正确;RT-PCR和Western blot都在Nef预期位置检测到特异性条带.结论:HIV-1 Nef基因在BCBL-1细胞和NIH/3T3细胞中获得了正确表达.
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| 关 键 词： | 人类免疫缺陷病毒1型 病毒复制负调控因子 真核表达 |
| 文章编号： | 1007-4368(2008)04-0434-06 |
| 收稿时间： | 2007/9/25 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2007年9月25日 |
Clone and expression of the Negative factor encoding gene of human immunodeficiency virus 1 in BCBL-1 cells and NIH/3T3 cells |
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| CAO Xu,HUA Li-xin,FEN Ning-han,LI Jiu-ming,Lv Zhi-gang,QIN Di and LU Chun.Clone and expression of the Negative factor encoding gene of human immunodeficiency virus 1 in BCBL-1 cells and NIH/3T3 cells[J].Acta Universitatis Medicinalis Nanjing,2008,28(4):434-438444. |
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| Authors: | CAO Xu HUA Li-xin FEN Ning-han LI Jiu-ming Lv Zhi-gang QIN Di and LU Chun |
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| Institution: | Department of Urology,the First Affiliated Hospital of NJMU,Nanjing 210029;Department of Urology,the First Affiliated Hospital of NJMU,Nanjing 210029;Department of Urology,the First Affiliated Hospital of NJMU,Nanjing 210029;Department of Urology,the First Affiliated Hospital of NJMU,Nanjing 210029;Department of Microbiology and Immunology,NJMU,Nanjing 210029,China;Department of Microbiology and Immunology,NJMU,Nanjing 210029,China;Department of Microbiology and Immunology,NJMU,Nanjing 210029,China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | human immunodeficiency virus 1 Negative factor eukaryotic expression |
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