间充质干细胞培养上清抑制星状细胞活化治疗肝纤维化的研究

目的：研究骨髓来源间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSC）条件培养基（mesenchymal stem cell-conditioned medium, MSC-CM）对肝纤维化是否有治疗作用及其作用机制。方法：6周龄SD大鼠随机分为3组（n=8）：模型组，治疗组，正常对照组。建立四氯化碳（CCL4）诱导大鼠肝纤维化模型，腹腔注射CCL4，1.5 mL/kg, 每周2次，持续8周。MSC培养至3~5代用于MSC-CM的制备，获取的MSC-CM并超滤浓缩约25倍，过滤除菌。在实验第5周起，治疗组经尾静脉注射2 mg/kg MSC-CM，每天1次至第8周末，同时模型组和正常组注射相同剂量的L-DMEM。至实验终点，按照原位灌注和密度梯度离心法提取肝星状细胞（hepatic stellate cells, HSC），并留取肝组织行病理学检查。通过Masson 染色和免疫组织化学染色法来检测胶原纤维沉积的程度和α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin , α-SMA）的表达程度；qRT-PCR 和Western blot 检测HSCs中α-SMA、转化生长因子β1（transforming growth factor β1，TGF-β1）、Ⅰ型胶原蛋白（CollagenⅠ）、基质金属蛋白酶-2（matrix metalloproteina-ses-2，MMP-2)、组织金属蛋白酶抑制剂-2（tissue inhibitor of metalloproteinases-2，TIMP-2)mRNA和蛋白的表达水平。结果：MSC-CM治疗组肝脏炎症程度较模型组减轻，胶原纤维和α-SMA表达量均较模型组明显降低(P<0.05)，但未达到正常组水平（P<0.05）。治疗组HSC中TGF-β1、α-SMA、CollagenⅠmRNA和蛋白表达水平较模型组明显下降(P<0.05)，MMP-2 mRNA表达水平较模型组升高（P<0.05）。结论：静脉注射MSC-CM对CCL4诱导的肝纤维化有一定治疗作用，这一过程可能与MSC-CM能降低TGF-β1的表达、抑制HSC活化及促进胶原蛋白降解有关。

Mesenchymal stem cells-conditioned medium reduces liver fibrosis by regulating hepatic stellate cells