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沉默脂联素受体1对脂多糖诱导的类风湿关节炎滑膜成纤维细胞MH7A增殖凋亡的影响
引用本文:王娅妮,赵鹏飞,谈文峰,张缪佳.沉默脂联素受体1对脂多糖诱导的类风湿关节炎滑膜成纤维细胞MH7A增殖凋亡的影响[J].南京医科大学学报,2017(9):1109-1113,1153.
作者姓名:王娅妮  赵鹏飞  谈文峰  张缪佳
作者单位:南京医科大学第一附属医院风湿免疫科,江苏 南京 210029,南京医科大学第一附属医院风湿免疫科,江苏 南京 210029,南京医科大学第一附属医院风湿免疫科,江苏 南京 210029,南京医科大学第一附属医院风湿免疫科,江苏 南京 210029
基金项目:国家自然科学基金(81671615);重点病种规范化诊疗研究(BL20130134);江苏省科技厅基础研究计划(BK2012875)
摘    要:目的:观察脂联素受体1(adiponectin receptor1, AdipoR1)沉默对脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导的人类风湿关节炎滑膜成纤维细胞(MH7A)增殖、凋亡的影响。 方法: ①利用免疫荧光、Western blot鉴定并验证shRNA技术对构建的AdipoR1沉默MH7A(sh-AdipoR1组)细胞的干扰效率;②分别用CCK8试剂盒、流式细胞仪检测LPS(100 ng/mL)对sh-AdipoR1组及空载病毒对照(sh-NC组)细胞增殖及凋亡的影响;③利用实时定量聚合酶链反应法(real-time polymerase chain reaction,realtime PCR)检测LPS对sh-AdipoR1及sh-NC组细胞中凋亡相关基因BCL-2、BCL-XL、BAX、BAK表达的影响。同时设置无LPS刺激的sh-NC、sh-AdipoR1组作为对照。 结果: ①荧光显微镜下可见sh-AdipoR1组细胞荧光蛋白表达效率趋近于100%,Western blot检测结果显示:与sh-NC组相比,sh-AdipoR1组AdipoR1蛋白的表达显著下降(P<0.05),表明AdipoR1沉默的细胞构建成功;②无LPS刺激情况下,sh-NC组与sh-AdipoR1组细胞增殖速率及凋亡细胞比例无明显差异;LPS刺激可显著增加sh-NC组和sh-AdipoR1组细胞相对增殖速率及凋亡细胞比例(P<0.05);在LPS作用24、48 h,sh-AdipoR1组细胞增殖速率均显著低于sh-NC组(P<0.05),而sh-AdipoR1组细胞凋亡率显著高于sh-NC组(P<0.05);③real-time PCR结果显示,无LPS刺激情况下,sh-NC组与sh-AdipoR1组抑制凋亡基因BCL-2、BCL-XL与促进凋亡基因BAK、BAX的相对表达量均无显著差异(P>0.05);LPS刺激可降低抑凋亡基因BCL-2、BCL-XL表达,增加促凋亡基因BAX、BAK表达(P<0.05);在LPS诱导下与sh-NC组相比,sh-AdipoR1组抑制凋亡基因BCL-2、BCL-XL表达下降,促凋亡基因BAX、BAK表达显著升高(P<0.05)。 结论:AdipoR1基因的沉默可抑制LPS诱导的MH7A细胞增殖,促进细胞凋亡,并提示AdipoR1相关信号通路可能在类风湿关节炎发生发展中起到重要作用,阻断该途径可有效阻断LPS诱导的MH7A细胞炎症反应。

关 键 词:脂联素受体1  类风湿关节炎  滑膜成纤维细胞  细胞增殖  细胞凋亡
收稿时间:2017/3/17 0:00:00

Effects of adiponectin receptor 1 knockdown on the proliferation and apoptosis of MH7A induced by lipopolysaccharide
Institution:Department of Rheumatology, the First Affiliated Hospital of NJMU, Nanjing 210029,China,Department of Rheumatology, the First Affiliated Hospital of NJMU, Nanjing 210029,China,Department of Rheumatology, the First Affiliated Hospital of NJMU, Nanjing 210029,China and Department of Rheumatology, the First Affiliated Hospital of NJMU, Nanjing 210029,China
Abstract:
Keywords:adiponectin receptor 1  rheumatoid arthritis  synovial fibroblasts  cell proliferation  cell apoptosis
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