人源抗TLR4抗体IgG2对对乙酰氨基酚诱导小鼠急性肝损伤的保护作用

目的：研究人源抗TLR4 抗体IgG2（human?TLR4 IgG2，hTLR4 IgG2）对对乙酰氨基酚（acetaminophen，APAP）诱导肝损伤的保护效应，探讨其在药物性肝损伤中的保护作用。方法：以人源抗TLR4 抗体Fab基因为模板，扩增其可变区基因，构建人源抗TLR4抗体IgG2真核表达载体，转染CHO?S细胞，筛选稳定表达细胞株，收集细胞上清，Protein G柱纯化抗TLR4抗体IgG2。将18只C57BL/6J 小鼠随机分成3组：生理盐水组、APAP（600 mg/kg）组和APAP +hTLR4 IgG2（5 mg/kg）组，统计小鼠腹腔注射APAP后 24 h的存活率；重复上述实验分组，检测小鼠腹腔注射APAP 8 h后，血清中丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase，ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（aspartate transaminase，AST）、白细胞介素?1（interleukin?1，IL?1）、白细胞介素?6（interleukin?6，IL?6）和肿瘤坏死因子?α（tumor necrosis factor?α，TNF?α）的表达水平，取肝脏做病理分析并使用Western blot检测凋亡蛋白的表达。结果：成功构建并表达纯化人源抗TLR4抗体IgG2；ELISA结果显示，抗体效价为1∶204 800。与APAP组相比，APAP+hTLR4 IgG2组小鼠的24 h存活率显著增加（P < 0.05）；血清AST、ALT以及炎性细胞因子的表达水平显著降低，具有统计学意义（P < 0.05）；病理分析结果显示，与模型组相比，人源抗TLR4抗体IgG2治疗组的小鼠肝组织炎性细胞浸润、充血和坏死等症状明显改善；Western blot结果显示凋亡相关蛋白的表达减少。结论：人源抗TLR4抗体IgG2能够抑制炎症因子的表达及细胞凋亡，对APAP诱导的小鼠肝损伤有显著的保护作用。