| 人类疱疹病毒8型ORF50基因截短片段和vIL-6全长基因的克隆?表达及表达产物的纯化 |
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| 引用本文： | 徐 静,朱晓蕾,秦 娣,卢 春.人类疱疹病毒8型ORF50基因截短片段和vIL-6全长基因的克隆?表达及表达产物的纯化[J].南京医科大学学报,2009,29(3):303-307. |
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| 作者姓名： | 徐 静 朱晓蕾 秦 娣 卢 春 |
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| 作者单位： | 南京医科大学微生物学与免疫学系,江苏,南京,210029
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| 基金项目： | 霍英东教育基金会高等院校青年教师基金 |
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| 摘 要： | 目的:克隆人类疱疹病毒8型(human herpesvirus 8,HHV-8)ORF50截短基因和编码病毒IL-6(vIL-6)全长基因,将其置于大肠杆菌中作融合表达.并纯化融合表达的vIL-6.方法:分别以本实验室先前构建的重组质粒pcDNA3.1+ORF50和peD-NA3.1+vIL-6为模板,PCR扩增目的基冈片段,克隆到原核表达载体pGEX-6p-1中,构建含HHV-8 ORF50截短基因的重组原核表达质粒pORF50-C1,pORF50-C2,pORF50-C3和含vIL-6伞长基因的重组原核表达质粒pvIL-6.重组质粒经酶切鉴定和核酸序列测定正确后转化大肠杆菌(E.coli)BL21(DE3)感受态细胞,以异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达融合蛋白.用glutathione Sepharese 4B亲和层析柱纯化vIL-6表达产物.用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)和Western blot检测GST融合蛋白的表达和纯化情况.结果:核酸序列分析的结果表明,克隆的序列与基因数据库中已登记的HHV-8相应序列呈现100%同源:IPTG诱导后的菌体.经SDS-PAGE,显示有相应大小的融合表达蛋白产生.Western blot亦在预期的位置检测到特异性条带.结论:在E.coli中获得了正确表达的HHV-8 ORF50基因3个截短片段和vIL-6全长基因,并成功纯化vIL-6融合蛋白.
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| 关 键 词： | 人类疱疹病毒8型 ORF50截短基因 vIL-6全长基因 原核表达 亲和层析 |
Cloning and expression of ORF50 truncated genes and the full length vIL-6 gene of human herpesvirus 8(HHV-8) in E.coli and purifying the vIL-6/GST fusion protein |
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| XU Jing,ZHU Xiao-lei,QIN Di and LU Chun.Cloning and expression of ORF50 truncated genes and the full length vIL-6 gene of human herpesvirus 8(HHV-8) in E.coli and purifying the vIL-6/GST fusion protein[J].Acta Universitatis Medicinalis Nanjing,2009,29(3):303-307. |
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| Authors: | XU Jing ZHU Xiao-lei QIN Di and LU Chun |
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| Institution: | Department of Microbiology and Immunology;NJMU;Naning 210029;China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | human herpesvirus 8(HHV-8) ORF50 truncated genes the full length vIL-6 gene prokaryotic expression affinity laminar analysis |
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