应用CRISPR/Cas9和Cas9⁃D10A建立Nsun5基因敲除小鼠模型并分析脱靶效应

目的：为了检测CRISPR/Cas9系统的潜在脱靶效应，分别利用野生型Cas9和切口酶Cas9?D10A构建了RNA甲基转移酶Nsun5基因敲除小鼠模型，并对两种策略得到的F0小鼠进行脱靶分析，以比较两种敲除策略的特异性。方法：针对Nsun5基因第3外显子，设计1对sgRNA，将野生型Cas9 mRNA和切口酶Cas9?D10A mRNA分别同这对sgRNA混合后注入小鼠一细胞期受精卵中，实现靶基因敲除，比较两种Cas9得到的F0代敲除小鼠的脱靶效应。结果：利用CRISPR/Cas9和Cas9?D10A成功建立Nsun5基因敲除小鼠模型，对两种Cas9得到的F0代突变小鼠进行潜在脱靶位点分析，均未检测到脱靶位点的存在。结论：两种策略都成功构建了不含脱靶位点的Nsun5基因敲除小鼠模型，为进一步研究Nsun5的生物学功能打下基础。