GGTA1/β4GalNT2双基因敲除近交系五指山小型猪的建立 |
| |
引用本文: | 李 楚,任雪洋,李 琳,厉小雪,金 永,张曼玲,刘晓蕊,熊 强,张立宁,王 盈,李荣凤,杨海元,冯书堂,戴一凡.GGTA1/β4GalNT2双基因敲除近交系五指山小型猪的建立[J].南京医科大学学报,2019(6):835-840. |
| |
作者姓名: | 李 楚 任雪洋 李 琳 厉小雪 金 永 张曼玲 刘晓蕊 熊 强 张立宁 王 盈 李荣凤 杨海元 冯书堂 戴一凡 |
| |
作者单位: | 南京医科大学江苏省异种移植重点实验室,江苏 南京 211166,南京医科大学江苏省异种移植重点实验室,江苏 南京 211166,南京医科大学江苏省异种移植重点实验室,江苏 南京 211166,南京医科大学江苏省异种移植重点实验室,江苏 南京 211166,南京医科大学江苏省异种移植重点实验室,江苏 南京 211166,南京医科大学江苏省异种移植重点实验室,江苏 南京 211166,南京医科大学江苏省异种移植重点实验室,江苏 南京 211166,南京医科大学江苏省异种移植重点实验室,江苏 南京 211166,南京医科大学江苏省异种移植重点实验室,江苏 南京 211166,南京医科大学江苏省异种移植重点实验室,江苏 南京 211166,南京医科大学江苏省异种移植重点实验室,江苏 南京 211166,南京医科大学江苏省异种移植重点实验室,江苏 南京 211166,北京盖兰德生物科技有限公司,北京 100010,南京医科大学江苏省异种移植重点实验室,江苏 南京 211166 |
| |
基金项目: | 国家重点研发计划(2017YFC1103701) |
| |
摘 要: | 目的:利用CRISPR/Cas9技术建立五指山小型猪近交系GGTA1/β4GalNT2双基因敲除克隆猪。方法:设计合成靶向猪GGTA1和β4GalNT2基因的单导向RNA(single guide RNA,sgRNA),以pX330质粒为骨架,分别构建GGTA1和β4GalNT2的Cas9打靶载体,转染至近交系五指山小型猪胎儿成纤维细胞(porcine fetal fibroblast,PFF)中,通过G418药物筛选和测序鉴定获得双基因敲除的单细胞克隆,然后利用体细胞克隆技术(somatic cell nuclear transfer,SCNT)获得双基因敲除的近交系五指山小型猪,并利用流式细胞技术检测克隆猪外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中αGal和Sd(a)抗原的表达。结果:成功构建GGTA1和β4GalNT2基因的Cas9/sgRNA表达载体,转染后获得双基因敲除的近交系五指山小型猪PFF细胞克隆 9个。SCNT成功获得了10只五指山小型猪近交系双基因敲除的克隆猪,其 PBMC无αGal和Sd(a)抗原的表达。结论:CRISPR/Cas9技术可以实现对猪GGTA1/β4GalNT2基因的编辑。本实验首次成功制备了GGTA1/β4GalNT2双基因敲除的近交系五指山型猪,为异种器官移植研究与应用提供了新的供体材料。
|
关 键 词: | 近交系五指山小型猪 GGTA1/β4GalNT2 CRISPR/Cas9 异种移植 |
收稿时间: | 2018/9/7 0:00:00 |
|
| 点击此处可从《南京医科大学学报》浏览原始摘要信息 |
| 点击此处可从《南京医科大学学报》下载免费的PDF全文 |
|