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甲型流感病毒FM1非结构蛋白(NS1)在大肠杆菌表达及其ELISA检测方法建立
引用本文:卢士强,周 锋,姜兰兰,茌 静,冯东举,姚 堃.甲型流感病毒FM1非结构蛋白(NS1)在大肠杆菌表达及其ELISA检测方法建立[J].南京医科大学学报,2009,29(1):23-27.
作者姓名:卢士强  周 锋  姜兰兰  茌 静  冯东举  姚 堃
作者单位:南京医科大学微生物与免疫学系,江苏,南京,210029  
摘    要:目的:构建流感病毒FM1非结构蛋白NS1全长基因表达载体在大肠杆菌(E.coli)中表达,并将表达蛋白用于病毒感染和疫苗免疫小鼠的血清检测.方法:提取流感病毒鸡胚尿囊液RNA,RT-PCR扩增NS1全长基因,克隆到pET28a,转化E.coliBL21感受态细胞,经酶切鉴定及序列分析,筛选出阳性重组质粒pET28-NS1.异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达融合蛋白,表达蛋白在变性条件下经镍柱亲和层析纯化,并用Western blot法检测其抗原活性.以纯化的NS1蛋白为抗原建立了检测NS1抗体的ELISA(NS1-ELISA)方法分别对7、15和30天灭活疫苗免疫和病毒感染小鼠血清进行检测.统计分析各组吸光度(A)差异,并以灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值等指标对NS1-ELISA进行方法学评价.结果:重组质粒经PCR及酶切鉴定为阳性,核酸序列分析正确.SDS-PAGE和Western blot结果显示表达重组蛋白分子质量约为26 ku.NS1-ELISA法在第15~30天,感染组血清吸光度明显高于疫苗免疫组.结论:成功获得了NSl重组基因表达蛋白,建立的NS1-ELISA法可用于病毒感染和疫苗免疫血清的鉴别检测.

关 键 词:鼠流感病毒  原核表达
收稿时间:2008/8/10 0:00:00

Prokaryotic expression of nonstructural protein(NS1) of murine influenza virus FM1 and its application in differentiating infected from vaccinated mice
LU Shi-qiang,ZHOU Feng,JIANG Lan-lan,CHI Jing,FENG Dong-ju and YAO Kun.Prokaryotic expression of nonstructural protein(NS1) of murine influenza virus FM1 and its application in differentiating infected from vaccinated mice[J].Acta Universitatis Medicinalis Nanjing,2009,29(1):23-27.
Authors:LU Shi-qiang  ZHOU Feng  JIANG Lan-lan  CHI Jing  FENG Dong-ju and YAO Kun
Institution:Department of Microbiology and Immunology;NJMU;Nanjing 210029;China
Abstract:Objective:To construct a plasmid pET28-NS1 for expression of nonstructural protein (NS1) of murine influenza virus FM1 in E.coli and utilize the NS1 protein in serological detection for differentiating infected from vaccinated mice. Methods:The NS1 gene of murine influenza virus A / FortMonmouth / 1 / 47(FM1) was amplified by RT-PCR and cloned into pET28a to construct a recombinant expression plasmid, named pET28-NS1. The constructed vector was identified by PCR, enzyme digestion and nucleotide sequences an...
Keywords:NS1  ELISA
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