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含自杀基因酵母菌Fcy::Fur融合基因重组逆转录病毒表达载体的构建与鉴定
引用本文:贾雪梅,王淑玉,王清,刘嘉茵,胡卫星,曾怡,黄丽.含自杀基因酵母菌Fcy::Fur融合基因重组逆转录病毒表达载体的构建与鉴定[J].南京医科大学学报,2004,24(2):150-152.
作者姓名:贾雪梅  王淑玉  王清  刘嘉茵  胡卫星  曾怡  黄丽
作者单位:[1]南京医科大学第一附属医院妇产科,江苏南京210029 [2]南京医科大学第一附属医院脑外科,江苏南京210029 [3]南京医科大学微生物学与免疫学系,江苏南京210029
基金项目:江苏省卫生厅135工程医学重点人才项目资助(135-50),南京医科大学科技发展基金项目(NY03029)
摘    要:目的:构建并鉴定含自杀基因酵母菌Fcy::Fur融合基因的重组逆转录病毒表达载体,拟将用于肿瘤的基因治疗研究。方法:设计一对PCR引物,在引物的5′端分别引入EcoRⅠ和BamHⅠ酶切位点。以质粒pORF5-Fcy::Fur为模板,采用常规PCR方法扩增Fcy::Fur融合基因,并将其分别克隆进测序载体PCS2^ 及原核表达载体pGEX-6p-1进一步进行核酸序列测定和原核诱导表达研究。用EcoRⅠ和BamHⅠ将Fcy::Fur融合基因从测序载体上切出,按正确阅读框架克隆进pLXSN中,重组子鉴定采用PCR法和酶切消化。结果:序列测定表明,扩增的基因即为Fcy::Fur序列.Fcy::Fur融合基因在大肠杆菌中获得了融合表达;重组逆转录病毒表达载体经PCR及双酶切鉴定表明:Fcy::Fur以正确方向插入到pLXSN中。结论:成功构建含有自杀基因Fcy::Fur的逆转录病毒表达载体,为进一步进行肿瘤实验性基因治疗奠定基础。

关 键 词:自杀基因  Fcy::Fur  逆转录病毒载体  构建
文章编号:1007-4368(2004)02-0150-03
修稿时间:2003年8月4日
本文献已被 CNKI 维普 万方数据 等数据库收录!
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