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重组免疫毒素抗c-Met/PE38KDEL免疫毒素的构建?表达及纯化
引用本文:朱晓娟,冯振卿,朱 进,张秀华,缪 林,季国忠,范志宁,刘 政.重组免疫毒素抗c-Met/PE38KDEL免疫毒素的构建?表达及纯化[J].南京医科大学学报,2009,29(7):920-924.
作者姓名:朱晓娟  冯振卿  朱 进  张秀华  缪 林  季国忠  范志宁  刘 政
作者单位:朱晓娟,张秀华,缪林,季国忠,范志宁,刘政,ZHU Xiao-juan,ZHANG Xiu-hua,MIAO Lin,JI Guo-zhong,FAN Zhi-ning,LIU Zheng(南京医科大学第二附属医院消化医学中心,江苏,南京,210011);冯振卿,FENG Zhen-qing(南京医科大学卫生部抗体技术重点实验室,江苏,南京210029);朱进,ZHU Jin(南京军区军事医学研究所,江苏,南京,210002)  
基金项目:卫生部科学研究基金,江苏省自然科学基金 
摘    要:目的:构建绿脓杆菌外毒素PE38KDEL融合全人源抗c-Met单链抗体原核表达载体,并对其产物进行变性、复性和纯化,检测其对肝癌细胞系的毒性作用.方法:以从人源天然Fab抗体库中筛选出的AM2-26克隆作为模板扩增出人源c-Met单链基因,采用基因工程原理,将扩增出的c-Met单链基因和PE38KDEL基因克隆入pBAD/GⅢA表达载体中,重组克隆载体经酶切及DNA序列测定证实两片段连接正确;转化大肠杆菌Top10F',左旋阿拉伯糖诱导表达,采用镍离子螯合层析法纯化变性的包涵体样品,并用连续梯度透析的方法对纯化后的包涵体进行复性;采用流式细胞术鉴定复性产物与靶细胞的结合活性,MTT法检测c-Met/PE38KDEL免疫毒素对肝癌细胞的体外杀伤活性.结果:成功构建了免疫毒素表达载体pBAD/GⅢA/c-Met/PE38KDEL;诱导产物主要以包涵体形式存在;复性后的免疫毒素c-Met/PE38KDEL具有与靶细胞特异性结合的活性并且对SMMC7721细胞系具有较明显的杀伤作用.结论:全人源抗c-Met单链抗体与PE38KDEL重组免疫毒素的成功表达纯化及对人肝癌细胞系的试验结果,为进一步肝癌的导向治疗提供依据.

关 键 词:免疫毒素  肝细胞癌  表达  纯化
收稿时间:2009/2/18 0:00:00

Construction,expression and purification of an immunotoxin containing a human anti-c-Met single-chain antibody fused to PE38KDEL
ZHU Xiao-juan,FENG Zhen-qing,ZHU Jin,ZHANG Xiu-hu,MIAO Lin,JI Guo-zhong,FAN Zhi-ning and LIU Zheng.Construction,expression and purification of an immunotoxin containing a human anti-c-Met single-chain antibody fused to PE38KDEL[J].Acta Universitatis Medicinalis Nanjing,2009,29(7):920-924.
Authors:ZHU Xiao-juan  FENG Zhen-qing  ZHU Jin  ZHANG Xiu-hu  MIAO Lin  JI Guo-zhong  FAN Zhi-ning and LIU Zheng
Institution:Department of Gastroenterology;the Second Affiliated Hospital of NJMU;Nanjing 210011;1Key Laboratory of Antibody Technique of Ministry of Health;NJMU;Nanjing 210029;2PLA Nanjing Military Area Command;Nanjing 210002;China
Abstract:
Keywords:c-Met  PE38
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