非小细胞肺癌奥希替尼耐药细胞株的建立与鉴定及耐药后对化疗的敏感性

目的：建立非小细胞肺癌奥希替尼耐药细胞株H1975AR，对亲本和耐药细胞株进行鉴定，探讨耐药机制。方法：在体外采用浓度递增的方法予奥希替尼处理诱导H1975细胞建立奥希替尼耐药细胞株H1975AR；光镜及Giemsa染色比较2种细胞形态学差异；第二代测序（next generation sequencing，NGS）检测表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor，EGFR）基因突变；磺酰罗丹明B（sulforthodamine B，SRB）法检测细胞增殖，评估细胞对EGFR?酪氨酸激酶抑制剂（tyrosine kinase inhibitor，TKI）和化疗药的敏感性；分别予0、10、100、1 000 nmol/L奥希替尼处理6 h，Western blot法检测EGFR及下游增殖信号的变化。结果：①SRB法测得H1975AR的耐药指数为3 634.75，显示H1975AR是奥希替尼耐药细胞株；②耐药细胞株形态发生改变且核浆比增大；③与H1975相比，给予奥希替尼处理对H1975AR的p?EGFR和p?ERK抑制作用不明显，且相同的给药浓度对H1975AR的p?AKT抑制作用较弱，同时下调c?Met的表达；④H1975和H1975AR对第一代EGFR?TKI耐药，对顺铂和紫杉醇敏感。结论：H1975AR细胞EGFR C797S顺式突变的产生是奥希替尼主要耐药机制，并对顺铂和紫杉醇敏感。