| 表达人泛素样修饰子基因细胞株的构建及其鉴定 |
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| 引用本文： | 鲁可可,朱虎,胡艳秋,袁娲,周作民,沙家豪,李建民.表达人泛素样修饰子基因细胞株的构建及其鉴定[J].南京医科大学学报,2004,24(4):332-336. |
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| 作者姓名： | 鲁可可 朱虎 胡艳秋 袁娲 周作民 沙家豪 李建民 |
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| 作者单位： | 南京医科大学江苏省生殖医学重点实验室,江苏南京210029 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目(2003,30370539) |
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| 摘 要： | 目的：构建人泛素样修饰子(hUBL)基因的逆转录病毒载体并转染293T细胞，以探讨其生物学功能。方法：将hUBL克隆到原核表达质粒PET28a中，构建重组质粒PET28a-hUBL，转化BL2l菌，以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。用其纯化蛋白免疫小鼠，获得多克隆抗体。重组蛋白用Westernblot鉴定。将hUBL基因克隆到逆转录病毒质粒中并转染293T细胞，用免疫组化染色法鉴定hUBL基因的表达。结果：hUBL在大肠杆菌中获得高效表达，并纯化了hUBL—PET28a的融合蛋白，以此为抗原制备了高效价的抗hUBL蛋白的小鼠多克隆抗体。免疫组化染色表明，hUBL重组逆转录质粒可在293T细胞中高效表达hUBL蛋白。结论：成功地构建了hUBL重组逆转录病毒载体，使得其在293T细胞中表达，获得稳定表达的细胞株。
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| 关 键 词： | 人泛素样修饰子（hUBL） 基因克隆 蛋白表达 逆转录病毒载体 293T细胞 |
| 文章编号： | 1007-4368(2004)04-0332-04 |
| 修稿时间： | 2003年12月1日 |
Construction and Identification of Cells Expressing hUBL Gene |
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| LU Ke-ke,ZHU Hu,HU Yan-qiu,YUAN Wa,ZHOU Zuo-min,SHA Jia-hao,LI Jian-min.Construction and Identification of Cells Expressing hUBL Gene[J].Acta Universitatis Medicinalis Nanjing,2004,24(4):332-336. |
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| Authors: | LU Ke-ke ZHU Hu HU Yan-qiu YUAN Wa ZHOU Zuo-min SHA Jia-hao LI Jian-min |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | human ubiquitin-like modifier(hUBL) gene cloning protein expression retrovirus vector 293T cells |
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