| 猪naive-like诱导性多能干细胞系的建立及红色荧光蛋白标记 |
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| 引用本文： | 姜海滨,张曼玲,赵丽华,金 永,陈 袁,王俊政,陈俏羽,李荣凤.猪naive-like诱导性多能干细胞系的建立及红色荧光蛋白标记[J].南京医科大学学报,2017(8):915-925. |
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| 作者姓名： | 姜海滨 张曼玲 赵丽华 金 永 陈 袁 王俊政 陈俏羽 李荣凤 |
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| 作者单位： | 南京医科大学江苏省异种移植重点实验室，江苏 南京 211166,南京医科大学江苏省异种移植重点实验室，江苏 南京 211166,南京医科大学江苏省异种移植重点实验室，江苏 南京 211166,南京医科大学江苏省异种移植重点实验室，江苏 南京 211166,南京医科大学江苏省异种移植重点实验室，江苏 南京 211166,南京医科大学江苏省异种移植重点实验室，江苏 南京 211166,南京医科大学江苏省异种移植重点实验室，江苏 南京 211166,南京医科大学江苏省异种移植重点实验室，江苏 南京 211166 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金（31371487） |
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| 摘 要： | 目的：建立猪naive-like诱导性多能干(induced pluripotent stem，iPS)细胞系，并对其进行红色荧光标记，为通过示踪猪naive iPS细胞发育和分化的相关研究奠定基础。方法：首先利用核转染技术向巴马小型猪胎儿成纤维细胞(porcine embryonic fibroblast，PEF)中转入鼠源OCT4、SOX2、KLF4和c-MYC转录因子表达载体TetO-FUW-OSKM，并同时转入激活表达载体FUW-M2rtTA，采用白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor，LIF)结合碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)的培养体系进行培养，通过在培养液中添加盐酸多西环素(doxycycline hyclate，DOX) 进行诱导，建立起猪iPS细胞系，并对细胞系的多能性进行鉴定。在此基础上，向iPS细胞系转入红色荧光蛋白表达载体，对其进行标记，并鉴定被红色荧光标记后的细胞是否仍然具有多能性。结果：所建立的iPS细胞系克隆呈三维立体生长，可以进行单细胞传代培养至30代以上，核型正常，碱性磷酸酶染色呈阳性，表达多种干细胞多能因子，利用LIF/STAT3信号通路维持其增殖，体外可分化形成表达三胚层相关基因的类胚体，为猪naive-like iPS细胞系。成功对所建立的iPS细胞系进行红色荧光标记，碱性磷酸酶染色和免疫荧光染色结果显示被红色荧光标记的iPS细胞的多能性依然存在。结论：成功建立了稳定表达红色荧光蛋白的猪naive-like iPS细胞系。
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| 关 键 词： | 猪诱导性多能干细胞系 多能性 核转染 红色荧光蛋白 |
| 收稿时间： | 2017/1/3 0:00:00 |
Establishment of porcine naive-like induced pluripotent stem cell line and labelling with red fluorescent protein |
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| Jiang Haibin,Zhang Manling,Zhao Lihu,Jin Yong,Chen Yuan,Wang Junzheng,Chen Qiaoyu and Li Rongfeng.Establishment of porcine naive-like induced pluripotent stem cell line and labelling with red fluorescent protein[J].Acta Universitatis Medicinalis Nanjing,2017(8):915-925. |
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| Authors: | Jiang Haibin Zhang Manling Zhao Lihu Jin Yong Chen Yuan Wang Junzheng Chen Qiaoyu and Li Rongfeng |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | porcine iPS pluripotency nucleofection red fluorescent protein |
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