广东汉族妊娠期糖尿病妇女胎盘组织microRNA差异表达谱分析

目的：探索妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus，GDM)与正常妊娠胎盘组织微小RNA(microRNA，miRNA)的差异表达，为深入研究GDM发病机制提供基础。方法：选取于2013年1月-2014年1月在武警广东省总队医院、南方医科大学珠江医院就诊并分娩的GDM孕妇20例作为观察组(GDM组)，均为粤籍汉族并且相互之间无亲缘关系，随机选取同期无妊娠合并症的正常广东汉族孕妇20例作为对照组。胎儿分娩岳收集胎盘组织，用TRIzol法进行总RNA提取，经过质量和纯度分析鉴定合格岳分别选取5个样本混合成GDM和对照组，采用逆转录法构建小RNA文库，使用第二代高通量测序采用边合成边测序的方法对miRNA进行测序并分析结果。结果：从胎盘组织提取到的总RNA纯度较高，D(260 nm)／D(280 nnl)>1.90，并成功构建小RNA的cDNA文库。采用高通量测序得到长度为10~35 nt的小RNA片段，其中文库数量最多的小RNA长度21~24 nt，miRNA量占所有小RNA总量的30％以上，最终获得洁净的片段超过10 000 000。将得到的片段与Genebank及Rfram数据库比对，去除其他小RNA筛选出miRNA达7 000多种。通过样本两两比较分析，与对照组相比，发现GDM组有138种已知的miRNA表达明显上调，包括has-miR-548au-5p、has-miR-95a-5p、has-miR-373-5p、has-miR-216-5p等(10g2-ratio>l，P<0.01)；16种已知miRNAs明显表达下调，如has-miR-5699-5p、has-miR-4286等(10g2-ratio<-1，P<0.01)。Mireap软件预测出27种新miRNA，其中有9种在GDM表达升高，6种表达降低。结论：GDM的胎盘组织miRNAs与对照组存在表达差异，胎盘组织miRNA可能在GDM发病过程中起一定的调节作用。

Investigation of microRNA expression profile of placental tissues between gestational diabetes mellitus(GDM)and normal pregnant women