| 利用可诱导表达Cas9的HeLa细胞系进行顺铂耐药性基因筛选 |
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| 引用本文： | 陈红全,王建瑛.利用可诱导表达Cas9的HeLa细胞系进行顺铂耐药性基因筛选[J].南京医科大学学报,2021(10):1432-1439. |
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| 作者姓名： | 陈红全 王建瑛 |
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| 作者单位： | 浙江大学医学院附属邵逸夫医院检验科，浙江 杭州 310016；南京医科大学生殖医学国家重点实验室，江苏 南京 211166 |
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| 基金项目： | 南京医科大学自然科学基金（NMUB2019033） |
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| 摘 要： | 目的：利用PiggyBac转座子系统，构建可诱导表达Cas9的稳定HeLa细胞系，并针对人核受体基因构建sgRNA文库，进行顺铂耐药性基因筛选。方法：构建PB?TRE?Cas9?NLS?IRES?hrGFP?Zeo载体，与PB?CAG?rtTA以及转座酶载体一同电转到HeLa细胞中，通过药筛和挑选单克隆得到稳定细胞系；构建核受体基因sgRNA病毒文库，并感染可诱导表达Cas9的HeLa细胞系，筛选对顺铂具有抵抗性的克隆，并进行目的基因的测序鉴定。结果：挑选出可诱导表达Cas9的8E单克隆细胞株，在5个基因位点上可以进行高效编辑；感染sgRNA文库之后，挑选顺铂耐药的克隆，并鉴定出大部分克隆含有VDR sgRNA，经测序发现这些克隆中的VDR基因发生突变。结论：利用PiggyBac转座子系统，构建了可诱导表达Cas9的稳定HeLa细胞系，利用这个细胞系可以在多位点进行高效基因编辑，并可用于高通量文库筛选顺铂耐药性基因。
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| 关 键 词： | CRISPR/Cas9 PiggyBac转座子 可诱导表达 文库筛选 |
| 收稿时间： | 2020/11/13 0:00:00 |
Screening of cisplatin resistance genes in HeLa cell line with inducible expression of Cas9 |
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| CHEN Hongquan,WANG Jianying.Screening of cisplatin resistance genes in HeLa cell line with inducible expression of Cas9[J].Acta Universitatis Medicinalis Nanjing,2021(10):1432-1439. |
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| Authors: | CHEN Hongquan WANG Jianying |
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