丙型肝炎病毒F蛋白原核表达载体的构建、表达和纯化 |
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引用本文: | 高亚丽,刘娇,刘湘,汤华,陈沂,蔡雪飞,唐霓.丙型肝炎病毒F蛋白原核表达载体的构建、表达和纯化[J].重庆医科大学学报,2009,34(4). |
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作者姓名: | 高亚丽 刘娇 刘湘 汤华 陈沂 蔡雪飞 唐霓 |
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作者单位: | 重庆医科大学感染性疾病分子生物学教育部重点实验室,重庆医科大学病毒性肝炎研究所,重庆,400016 |
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摘 要: | 目的:构建丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)F蛋白的原核表达载体,表达pET32a(+)-HCVF融合蛋白.方法:根据丙型肝炎病毒F基因的全序列设计引物,以HCV1a型cDNA质粒H/FL为模板,通过PCR方法扩增得到F基因的编码区序列,将其定向克隆于含有6×His tag的原核表达载体pET32a(+),转化大肠杆菌JM109,经菌落PCR筛选,双酶切和测序鉴定阳性克隆后,转化大肠杆菌BL21,采用IVTG诱导表达融合蛋白,表达产物经SDS-PAGE电泳分析和Western-blot检测鉴定,并用Ni-NTA亲和层析柱纯化.结果:F基因以正确的方式插入到pET32a(+)载体中,重组质粒转化大肠杆菌BL21后经IPTG诱导表达,出现了与预期分子量相符的蛋白条带,该蛋白通过Western blot检测具有6×His tag蛋白的免疫学活性.结论:成功构建了丙型肝炎病毒F蛋白的原核表达载体pET32a(+)-HCVF并表达和纯化出重组融合蛋白,为进一步研究F蛋白的生物学功能奠定了基础.
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关 键 词: | 丙型肝炎病毒 F蛋白 原核表达 |
Prokaryotic expression, identification and purification of HCV F protein |
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