| 甲基化特异性PCR技术的质量控制及改进 |
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| 引用本文： | 顾立萍,刘斌,邢传平,黄小玲,高自芳,苏勤军,钱震,董亮.甲基化特异性PCR技术的质量控制及改进[J].第四军医大学学报,2008,29(18):1648-1651. |
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| 作者姓名： | 顾立萍 刘斌 邢传平 黄小玲 高自芳 苏勤军 钱震 董亮 |
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| 作者单位： | [1]兰州大学基础医学院病理研究所,甘肃兰州730000 [2]兰州军区兰州总医院病理科,甘肃兰州730050 |
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| 基金项目： | 解放军医药卫生科研项目，甘肃省自然科学基金 |
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| 摘 要： | 目的:改进甲基化特异性PCR(MSP)技术并控制实验质量.方法:采用改进的MSP法检测正常胃粘膜及胃癌组织中eaveolin-1基因的甲基化状况.运用饱和酚-氯仿抽提法提取DNA,其中石蜡包埋组织连续切片厚度为8μm;采用热启动PCR:反应体系为25μL、变性温度设定为95.5℃、循环数设定为30.结果:新鲜组织较石蜡包埋组织更适于MSP实验,但福尔马林固定石蜡包埋组织同样可用于MSP实验,并且8μm厚的石蜡包埋组织能获得较完整的DNA链.热启动PCR效果良好:25μL体系敏感性优于50μL体系,95.5℃可以使含CpG岛的DNA链解链更完全,30个循环足以扩增小于150 bp的目的片段.结论:采用改进的MSP技术,可获得较好的DNA模板,提高实验的灵敏度和成功率,更适于甲基化的研究.
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| 关 键 词： | 甲基化 聚后酶链反应 DNA/分离和提纯 胃肿瘤 |
Quality control and improvement of Methylation-specific Polymerase Chain Reaction |
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| GU Li-Ping,LIU Bin,XING Chuan-Ping,HUANG Xiao-Ling,GAO Zi-Fang,SU Qin-Jun,QIAN Zhen,DONG Liang.Quality control and improvement of Methylation-specific Polymerase Chain Reaction[J].Journal of the Fourth Military Medical University,2008,29(18):1648-1651. |
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| Authors: | GU Li-Ping LIU Bin XING Chuan-Ping HUANG Xiao-Ling GAO Zi-Fang SU Qin-Jun QIAN Zhen DONG Liang |
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