脂质体介导NF-κB decoy ODN低温缺氧对ECV-304的转染及复氧后对其黏附分子mRNA表达的影响

目的:探讨在Euro-Collin's(ECs)中,低温缺氧条件下脂质体(in vivo liposome)介导NF-κB诱捕物寡核苷酸(NF-κB decoy ODN)对人脐静脉内皮细胞株(ECV-304)的转染效率以及复氧后对其NF-κB活性及受其调控的黏附分子mRNA表达的影响. 方法:应用脂质体/decoy ODN、脂质体/scrambled ODN复合物,在低温缺氧的ECs转染ECV-304. 应用荧光显微镜和流式细胞仪,观察在4℃条件下,decoy ODN浓度为1.0 μmol/L的ECs缺氧保存ECV-304 6 h后的平均荧光强度(MFI)和摄取率以及ODN的胞内分布;同时设立裸ODN转染为对照, 观察脂质体介导decoy ODN对ECV-304的转染效率. 应用凝胶电泳迁移改变试验(EMSA)分析ECV-304低温缺氧保存6 h/复氧后不同时间的NF-κB 活性以及decoy ODN对NF-κB活性抑制效果. 利用RT-PCR方法检测各组ECV-304的ICAM-1, VCAM-1以及P-selectin的mRNA表达. 结果:ECV-304在ECs中4℃缺氧保存6 h后,脂质体介导ODN对ECV-304转染的MFI为1072.7±33.1,是裸ODN转染的91.1倍,细胞对ODN的摄取率为(93.1±2.6)%,是裸ODN转染的71.5倍;脂质体介导ODN 转染的ECV-304,荧光显微镜下可见部分荧光颗粒分布于胞质,胞核内呈强荧光颗粒,而裸ODN转染的ECV-304,胞质内偶见少量荧光,胞核内未见荧光颗粒. ESMA显示ECV-304低温缺氧保存6 h/复氧后1 h NF-κB活性开始升高,4 h达到高峰;转染decoy ODN的ECV-304复氧后4 h其NF-κB活性受到抑制,而转染scrambled.ODN的ECV-304复氧后4 h其NF-κB不被抑制. RT-PCR结果显示decoy ODN转染ECV-304后,其ICAM-1, VCAM-1以及P-selectin的mRNA的表达低于未转染组和scrambled.ODN转染组,有显著性差异. 结论:在ECs中以及低温缺氧条件下,脂质体能高效地将decoy ODN转染到ECV-304的胞核中,而裸ODN则不能进入细胞;经decoy ODN转染的ECV-304,在低温缺氧保存/复氧后,其NF-κB活性被抑制,并且其黏附分子的mRNA表达被抑制.

Transfection of NF-κB decoy ODN mediated by liposome on ECV-304 under hypothermic/anoxic condition and influence on expression of adhesive molecules after reoxygenation