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应用改良体细胞基因敲入技术内源标记跨膜丝氨酸蛋白酶RHBDD1的研究
引用本文:宋伟,李尚泽,张慧慧,缪时英,王琳芳,张晓东,杜润蕾.应用改良体细胞基因敲入技术内源标记跨膜丝氨酸蛋白酶RHBDD1的研究[J].医学研究杂志,2011,40(11):21-24.
作者姓名:宋伟  李尚泽  张慧慧  缪时英  王琳芳  张晓东  杜润蕾
作者单位:1. 中国医学科学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室/北京协和医学院(清华大学医学部)基础学院, 北京,100005
2. 430072,武汉大学生命科学学院
基金项目:国家重大研究计划基金,国家重点实验室专项基金,中国医学科学院基础医学研究所院(所)长基金
摘    要:目的应用改良的体细胞基因敲入技术将标签序列靶向敲入目的基因。方法设计引物并构建RHBDD1的打靶载体,经过腺相关病毒包装、感染、新霉素筛选和鉴定等步骤获得含有新霉素抗性的阳性单克隆细胞株,最后通过cre病毒感染和筛选获得RHBDD1内源敲入FLAG和SBP双标签的HCT116结直肠癌细胞株。结果经过包装病毒感染与筛选验证后得到6个打靶阳性克隆;进一步经cre病毒感染与筛选后得到2株去除新霉素抗性标记的阳性细胞克隆;通过Western blotting实验证明RHBDD1-FLAG-SBP融合蛋白的表达。结论通过改良的体细胞基因敲入技术成功构建跨膜丝氨酸蛋白酶RHBDD1内源敲入FLAG和SBP双标签的HCT116结直肠癌细胞株。

关 键 词:基因敲入  RHBDD1  同源重组
收稿时间:2011/6/24 0:00:00
修稿时间:2011/6/28 0:00:00

Study of Epitope Tagging of Intramembrane Serine Protease RHBDD1 by Improved Somatic Cell Knock-in Approach
Song Wei,Li Shangze,Zhang Huihui,Miao Shiying,Wang Linfang,Zhang Xiaodong,Du Runlei.Study of Epitope Tagging of Intramembrane Serine Protease RHBDD1 by Improved Somatic Cell Knock-in Approach[J].Journal of Medical Research,2011,40(11):21-24.
Authors:Song Wei  Li Shangze  Zhang Huihui  Miao Shiying  Wang Linfang  Zhang Xiaodong  Du Runlei
Institution:Song Wei,Li Shangze,Zhang Huihui,Miao Shiying,Wang Linfang,Zhang Xiaodong,Du Runlei.National Key Laboratory of Medical Molecular Biology,Institute of Basic Medical Sciences,CAMS and PUMC,Beijing 100005,China
Abstract:Objective To apply improved somatic cell knock-in methods for endogenous tagging of target gene.Methods We designed primers and constructed targeting vector of RHBDD1.After adeno-associated virus(AAV) packaging,targeting,screening and verification,positive cell clones with neomycin resistance were obtained.Finally,we excised neomycin marker with adenovirus expressing cre-recombinase to get HCT116 cell line expressing FLAG and SBP tagged RHBDD1.Results Six positive clones were identified through AAV infectio...
Keywords:Knock-in  RHBDD1  Homologous recombination  
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