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蚯蚓脱氧核糖核酸酶纯化及酶学性质
引用本文:张建林,刘志贞,王晓媛,姚建强,罗佳,王建华,杨利军,杨琦,牛勃.蚯蚓脱氧核糖核酸酶纯化及酶学性质[J].北京大学学报(医学版),2008,40(5):519-523.
作者姓名:张建林  刘志贞  王晓媛  姚建强  罗佳  王建华  杨利军  杨琦  牛勃
作者单位:1. 山西医科大学生物化学与分子生物学系,太原,030001
2. 首都儿科研究所
3. 山西医科大学科技处
4. 中国疾病预防与控制中心
5. 山西医科大学生物化学与分子生物学系,太原,030001;首都儿科研究所
基金项目:国家自然科学基金,山西省青年科研项目
摘    要:目的:从蚯蚓组织中纯化得到一种脱氧核糖核酸酶(取名为蚯蚓脱氧核糖核酸酶,简称EDNase)并研究其酶学性质.方法:采用丙酮沉淀、离子交换层析、高效液相层析、SDS-PAGE电泳,毛细管等点聚焦电泳和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱等方法.结果:经证实这种纯化方案的纯化倍数是137,酶得率为45.6%.EDNase的相对分子质量约为63 000.Mg2 ,Mn2 和ca2 对酶活性有较强的抑制作用,而Na 则轻微的提高酶的活性.在pH 4.4~5.2的范围内EDNase酶活性稳定,其最适pH值为4.8.该酶的最适温度为37℃,在40℃范围内酶具有较高的稳定性.EDNase的等电点为6.20.在以小牛胸腺DNA为底物的条件下,酶的Km为1.52 g/L,Vmax为4.89 mg/(mL·min).该酶可有效降解超螺旋质粒DNA,线状λ-噬菌体DNA和细菌染色体DNA,对RNA未见任何降解作用.结论:这种酶具有独特的酶学性质,不同于以往所知的脱氧核糖核酸酶.

关 键 词:脱氧核糖核酸酶类  分离和提纯  寡毛目

Purification and characterization of deoxyribonuclease from earthworm Eisenia foetida
ZHANG Jian-lin,LIU Zhi-zhen,WANG Xiao-yuan,YAO Jian-qiang,LUO Jia,WANG Jian-hua,YANG Li-jun,YANG Qi,NIU Bo.Purification and characterization of deoxyribonuclease from earthworm Eisenia foetida[J].Journal of Peking University:Health Sciences,2008,40(5):519-523.
Authors:ZHANG Jian-lin  LIU Zhi-zhen  WANG Xiao-yuan  YAO Jian-qiang  LUO Jia  WANG Jian-hua  YANG Li-jun  YANG Qi  NIU Bo
Institution:ZHANG Jian-lin1,LIU Zhi-zhen1,WANG Xiao-yuan1,YAO Jian-qiang1,LUO Jia2,WANG Jian-hua2,YANG Li-jun3,YANG Qi4,NIU Bo1,2(1.Department of Biochemistry , Molecular Biology,Shanxi Medical University,Taiyuan 030001,China,2.Capital Institute of Pediatrics,3.Office of Science , Technology,4.Chinese Center for Disease Control , Prevention)
Abstract:Objective:To purify a kind of deoxyribonuclease from earthworm Eisenia foetida(named earthworm DNase,EDNase)and study its characteristics.Methods:Acetone precipitation,ion-exchange chromatography,high performance liquid chromatography,SDS-PAGE,Capillary electrophoresis isoelectric focusing and MALDI-TOP MS were used for the study.Results:This purified protocol improved 137-fold purification and 45.6 % recovery of enzyme activity.The molecular mass of EDNase was estimated to be 63 000.Mg2+,Mn2+ and Ca2+ were...
Keywords:Deoxyribonucleases  Isolation and purification  Oligochaeta
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