| 人心钠素的蛋白质工程研究——Ⅰ.一种人心钠素衍生物RH-1的基因合成及克隆表达 |
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| 引用本文： | 任皓,卢圣栋,王启松,闵永洁,翁绳周.人心钠素的蛋白质工程研究——Ⅰ.一种人心钠素衍生物RH-1的基因合成及克隆表达[J].中国医学科学院学报,1990(1). |
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| 作者姓名： | 任皓 卢圣栋 王启松 闵永洁 翁绳周 |
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| 作者单位： | 中国医学科学院基础医学研究所，中国医学科学院基础医学研究所，复旦大学遗传学研究所，复旦大学遗传学研究所，厦门大学生物学系 北京，北京 |
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| 基金项目： | 国家863计划项目资助 |
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| 摘 要： | 在心钠素结构改造的蛋白质工程研究中,本工作首次提出以“分子嵌合法”构建心钠素衍生物的设计思想,并设计了系列心钠素衍生物RH-1、RH-2和RH-3。为阻止羧肽酶对心钠素的降解,羧肽酶抑制剂SQ20881被串联于α-bANP的N端,二个脯氨酸被串联于C端,从而形成杂合的心钠素衍生物分子RH-1,衍生物RH-2仅在α-hANP的N端嵌合SQ20881,衍生物RH-3则只在α-hANP的C端嵌合二个脯氨酸。用DNA合成仪合成RH-1基因的全部10个片段,经纯化拼接成全基因,并经核苷酸序列分析得以确认。克隆RH-1基因于表达性载体pLSD-13,构成pRHL-1重组体,并经限制性内切酶分析和Southern杂交证明了RH-1基因的正确插入。用大肠杆菌N6405菌株表达该基因,SDS/PAGE分析证实了衍生物RH-1基因的表达。凝胶扫描表明,表达蛋白量约占细胞可溶性蛋白的11％。
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| 关 键 词： | 蛋白质工程 心纳素 DNA合成 基因表达 |
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