| mRNA差异显示方法的建立及条件优化 |
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| 引用本文： | 王小伟,孙俊红,籍晓元,杜秋香,王英元.mRNA差异显示方法的建立及条件优化[J].山西医科大学学报,2008,39(4):289-292. |
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| 作者姓名： | 王小伟 孙俊红 籍晓元 杜秋香 王英元 |
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| 作者单位： | 山西医科大学法医学院病理学教研室,太原,030001 |
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| 基金项目： | 山西省留学回国人员科研启动基金
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山西省青年科研项目 |
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| 摘 要： | 目的 研究大鼠皮肤肌肉特异性基因的表达,探讨引物的不同、退火温度变化与扩增产物特异性之间的关系. 方法 12只健康雄性Sprague-Dawley大鼠分为正常对照组与实验组(挫伤4 h).分别提取总RNA,反转录成cDNA,通过不同引物、退火温度及反应体系进行PCR产物扩增,比较不同条件下差异条带的情况. 结果 总RNA量在2～4 μg时,扩增条带最亮;提高反转录温度有利于长片段cDNA的合成;使用TaKaRa公司带有T7启动子的Oligo dT12 NM和M13的随机引物时,可最大限度地减少非特异性条带;先使用低严谨的退火温度,再使用高严谨的退火温度可显著地增强差异条带重复性和敏感性. 结论 差异显示技术方法简便、灵敏、高效,适用于一般性的基因差异表达研究.
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| 关 键 词： | 差异显示技术 锚定引物 随机引物 退火温度 mRNA 差异表达 显示方法 条件优化 optimization 基因 显示技术 敏感性 增强 退火温度 特异性条带 随机引物 启动 使用 合成 长片段 扩增条带 结果 情况 差异条带 |
| 文章编号： | 1007-6611(2008)04-0289-04 |
| 修稿时间： | 2007年11月23 |
PAGESS Establishment and optimization of mRNA differential-PCR |
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| WANG Xiao-wei,SUN Jun-hong,JI Xiao-yuan,DU Qiu-xiang,WANG Ying-yuan.PAGESS Establishment and optimization of mRNA differential-PCR[J].Journal of Shanxi Medical University,2008,39(4):289-292. |
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| Authors: | WANG Xiao-wei SUN Jun-hong JI Xiao-yuan DU Qiu-xiang WANG Ying-yuan |
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| Institution: | Dept of Pathology;School of Forensic Medicine;Shanxi Medical University;Taiyuan 030001;China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | differential display technique anchoring primer arbitrary primer annealing temperature |
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