野马追内酯O诱导三阴性乳腺癌BT-20细胞凋亡的作用机制研究

目的] 通过体内外实验探究野马追内酯O(eupalinolide O，EO)对人乳腺癌BT-20细胞的作用及机制。方法] 采用噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium，MTT)法测定EO对BT-20细胞的抑制作用及半数抑制浓度，以确定EO浓度。将BT-20细胞分为空白对照组、EO 5 μmol·L-1组、EO 10 μmol·L-1组，后两组以EO处理24 h，采用乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase，LDH)法检测细胞毒性；流式细胞术检测细胞周期和凋亡情况。24只裸鼠通过乳腺脂肪垫注射BT-20细胞，建立乳腺癌模型，并随机分为对照组、阿霉素组(7 mg·kg-1)，EO低剂量组(15 mg·kg-1)和EO高剂量组(30 mg·kg-1)，每组6只。除对照组外，各组裸鼠连续腹腔注射对应药物治疗21 d，期间测量体表肿瘤体积；结束后称取肿瘤质量，并采用免疫组化染色检测肿瘤组织中增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen，PCNA)和Ki-67表达。采用免疫印迹法检测细胞和裸鼠肿瘤组织中B细胞淋巴瘤-2(B-cell lymphoma-2，Bcl-2)、Bcl-2关联X(Bcl-2 associated X protein，Bax)、聚ADP核糖聚合酶(poly ADP-ribose polymerase，PARP)、活化的半胱氨酸蛋白酶-3(cleaved cysteinyl aspartate specific proteinase-3，cleaved caspase-3)和活化的半胱氨酸蛋白酶-9(cleaved cysteinyl aspartate specific proteinase-9，cleaved caspase-9)蛋白表达。 结果] EO对BT-20细胞的抑制作用具有剂量-时间依赖性。与空白对照组比较，EO 5、10 μmol·L-1组细胞毒性和凋亡率增加(P＜0.05，P＜0.01)，且EO 10 μmol·L-1组的细胞周期明显阻滞于G2/M期(P＜0.01)。与对照组比较，阿霉素组、EO低剂量组、EO高剂量组的裸鼠肿瘤质量显著降低(P＜0.01，P＜0.05)，肿瘤组织内PCNA和Ki-67抗原表达显著降低(P＜0.01)，肿瘤体积随治疗进展显著缩小(P＜0.01，P＜0.05)。与空白对照组比较，各组细胞的Bcl-2蛋白表达降低(P＜0.01，P＜0.05)，Bax、PARP、cleaved caspase-3及cleaved caspase-9蛋白表达升高(P＜0.01，P＜0.05)；与对照组裸鼠比较，各给药组的Bcl-2蛋白表达降低(P＜0.01，P＜0.05)，Bax、PARP、cleaved caspase-3及cleaved caspase-9蛋白表达升高(P＜0.01，P＜0.05)。结论] EO在体内外抑制BT-20细胞增殖并诱导细胞凋亡，作用机制可能与其抑制Bcl-2蛋白表达，促进Bax、PARP、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9蛋白表达有关。

Study on the Mechanism of Eupalinolide O Inducing Apoptosis in Triple Negative Breast Cancer BT-20 Cells