| HIF-1α基因慢病毒载体的构建和鉴定 |
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| 引用本文： | 王标,余勤,周丽萍,付珊,朱振洪,单威,刘伟,胡韶君.HIF-1α基因慢病毒载体的构建和鉴定[J].浙江中医药大学学报,2012,36(11):1221-1224. |
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| 作者姓名： | 王标 余勤 周丽萍 付珊 朱振洪 单威 刘伟 胡韶君 |
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| 作者单位： | 1. 浙江中医药大学生物工程学院 杭州 310053
2. 浙江大学医学院附属第一医院 |
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| 基金项目： | 浙江省自然科学基金，浙江省医药卫生科技计划，浙江省科技计划项目 |
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| 摘 要： | 目的]构建带有大鼠HIF-1α基因的慢病毒表达载体,并进行病毒颗粒的包装与对293T的转染.方法]从pEGFP-N1-HIF-1α载体中扩增出HIF-1α基因片段,将目的基因与pLenti6.3-MCS-RES2-EGFP载体连接,获得慢病毒表达载体pLenti6.3-HIF-1 α-IRES2-EGFP,并用磷酸钙转染法将其与慢病毒包装系统共同转染到293T细胞内进行病毒包装,48h后收集上清液并过滤,按不同感染复数感染293T细胞,通过观察报告基因绿色荧光蛋白的表达来测定病毒滴度和感染效率.结果]构建了共表达HIF-1α基因和EGFP基因的重组慢病毒载体pLenti6.3-HIF-1 α-IRES2-EGFP,经PCR及测序结果证实,并对其成功包装出慢病毒,病毒滴度为4×106TU/ml.结论]成功构建出HIF-1α基因重组慢病毒载体pLenti6.3-HIF-1 α-IRES2-EGFP并能有效的包装出慢病毒.
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| 关 键 词： | HIF-1α 慢病毒载体 293T细胞 |
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