| endostatin基因重组腺病毒的构建及在人肺腺癌细胞的表达 |
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| 引用本文： | 魏玲,宋现让,王兴武,宋宝,郑燕.endostatin基因重组腺病毒的构建及在人肺腺癌细胞的表达[J].中国现代医学杂志,2008,18(6):710-714. |
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| 作者姓名： | 魏玲 宋现让 王兴武 宋宝 郑燕 |
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| 作者单位： | 山东省肿瘤医院基础研究中心,山东,济南,250117 |
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| 摘 要： | 目的 利用AdEasy系统构建鼠内皮抑素(ES)基因重组腺病毒Ad.ES,并观察其在人肺腺癌细胞SPCA-1的表达.方法 采用酶切、连接和转化等方法,将质粒pcDNA3.ES中的ES片段插入腺病毒穿梭质粒载体pAdTrack.CMV,构建重组腺病毒穿梭质粒载体pAdTrack.CMV.ES,经Pme Ⅰ酶切线性化后与含腺病毒基因骨架的质粒载体pAdEasy-1在细菌BJ5183内进行同源重组得到腺病毒质粒pAd.ES,重组腺病毒质粒经PacⅠ酶切后,转染人胚肾293细胞包装成腺病毒颗粒Ad.ES,将病毒上清反复感染293细胞获得高滴度病毒,应用氯化铯(CsCl)梯度离心的方法纯化病毒,利用AdEasy系统上的绿色荧光蛋白(GFP)标签测定重组腺病毒的功能滴度.用2 MOI重组腺病毒Ad.ES体外转导SPCA-1细胞48h,流式细胞仪检测GFP表达阳性率,ELISA法测定细胞培养上清液中ES的含量.结果 双酶切证实重组腺病毒穿梭载体pAdTrack.CMV.ES质粒构建正确,卡那霉素抗性筛选和Pac Ⅰ酶切鉴定证实腺病毒重组质粒构建成功.Pac Ⅰ酶切线性化的重组质粒导入293细胞3d,约20%的细胞表达GEP,回收病毒重复感染293细胞,CsCl梯度离心纯化最终获得约5.6×1010TU/mL滴度的重组病毒.Ad.ES体外转导SPCA-1细胞48h后,细胞GFP阳性率为93%,细胞培养上清液中ES的含量较Ad.GFP感染组和阴性对照组明显增加(P＜0.05).结论 应用新型腺病毒载体AdEasy系统可在短期内制备同时表达GFP和ES的重组腺病毒,Ad.ES体外感染人肺腺癌细胞SPCA-1可显著提高ES表达,为进一步研究抗血管生成治疗肺癌奠定了基础.
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| 关 键 词： | 肺癌 腺病毒 内皮抑素 基因治疗 endostatin 基因重组 病毒 人肺腺癌细胞 细胞表达 cell line lung adenocarcinoma human effect gene murine adenovirus vector recombinant 肺癌 治疗 抗血管生成 研究 体外感染 毒载体 对照组 |
| 文章编号： | 1005-8982(2008)06-0710-04 |
| 修稿时间： | 2007年10月28 |
Construction of recombinant adenovirus vector expressing murine endostatin gene and its effect on human lung adenocarcinoma cell line SPCA-1 |
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| WEI Ling,SONG Xianrang,WANG Xingwu,SONG Bao,ZHENG Yan.Construction of recombinant adenovirus vector expressing murine endostatin gene and its effect on human lung adenocarcinoma cell line SPCA-1[J].China Journal of Modern Medicine,2008,18(6):710-714. |
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| Authors: | WEI Ling SONG Xianrang WANG Xingwu SONG Bao ZHENG Yan |
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| Institution: | WEI Ling,SONG Xianrang,WANG Xingwu,SONG Bao,ZHENG Yan (Cancer Research Center,Sh,ong Tumor Hospital,Jinan,Sh,ong 250117,P.R.China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | lung neoplasm murine endostatin gene adenovirus gene therapy |
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