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| 新基因PRR11的克隆、真核表达载体的构建及鉴定 | |
| 引用本文： | 徐瑲,卜友泉,郭勇,崔涛,兰欢.新基因PRR11的克隆、真核表达载体的构建及鉴定[J].泸州医学院学报,2011,34(5):475-479. |
| 作者姓名： | 徐瑲 卜友泉 郭勇 崔涛 兰欢 |
| 作者单位： | 1. 泸州医学院组织胚胎学教研室,四川泸州,646000 2. 重庆医科大学 生物化学与分子生物学教研室 3. 重庆医科大学 分子医学与肿瘤研究中心 4. 泸州医学院心肌电生理学研究室 |
| 基金项目： | 国家自然科学基金(30801356、30871237、30872758); 重庆市科委自然科学基金(2007BB5302); 重庆医科大学重点课题资助项目(XBZD200707) |
| 摘 要： | 目的：克隆新基因PRR11的开放阅读框区,构建其真核表达载体,并进行表达检测及鉴定。方法：以HeLa细胞cDNA为模板,半定量RT-PCR扩增PRR11基因,克隆入真核表达载体pcDNA3.1中,酶切、测序鉴定确认获得PRR11基因的重组真核表达载体pcDNA3.1-PRR11。然后将pcDNA3.1-PRR11重组载体转染入HeLa细胞中,收集细胞,制备总RNA和细胞裂解液,采用半定量RT-PCR和蛋白质免疫印迹法检测目的基因表达情况。结果：成功扩增了PRR11基因,双酶切、测序鉴定证实目的基因成功克隆到真核表达载体pcDNA3.1中,测序结果表明序列完全正确,pcDNA3.1-PRR11真核重组表达载体构建成功。半定量RT-PCR和蛋白质免疫印迹法证实了转染入HeLa细胞中的目的基因表达成功。结论：成功构建了PRR11基因的真核表达载体,并可在HeLa细胞中成功表达,为进一步研究PRR11基因的功能奠定了基础。 |
| 关 键 词： | PRR11 pcDNA3．1 真核表达 |
CLONING,EUKARYOTIC EXPRESSION AND IDENTIFICATION OF A NOVEL GENE PRR11 |
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| Xu Qiang,et al.CLONING,EUKARYOTIC EXPRESSION AND IDENTIFICATION OF A NOVEL GENE PRR11[J].Journal of Luzhou Medical College,2011,34(5):475-479. | |
| Authors: | Xu Qiang |
| Institution: | Xu Qiang,et al Department of Histology and Embryology,Luzhou Medical College |
| Abstract: | Objective: To clone PRR11 gene,construct the recombinant eukaryotic expression vector of human PRR11,and identify its exogenous expression in HeLa cell.Methods: PRR11 gene was amplified by RT-PCR from HeLa cell cDNA,and cloned into eukaryotic expression vector pcDNA3.1 to construct pcDNA3.1-PRR11.The recombinant plasmid was subsequently transfected into HeLa cell.Forty-eight hours after transfection,total RNA and whole cell lysates were prepared and subjected to RT-PCR and Western blot.Results: PRR11 gene w... |
| Keywords: | PRR11 pcDNA3 1 Eukaryotic expression |
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