| 血红素氧合酶-1基因真核表达载体的构建及其在大鼠腹膜间皮细胞中的表达 |
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| 引用本文： | 朱淳,郭志勇,刘怡晟,黄海东,蒋更如.血红素氧合酶-1基因真核表达载体的构建及其在大鼠腹膜间皮细胞中的表达[J].上海交通大学学报(医学版),2013,33(4):425-429. |
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| 作者姓名： | 朱淳 郭志勇 刘怡晟 黄海东 蒋更如 |
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| 作者单位： | 1. 上海交通大学医学院附属新华医院肾内科,上海,200092
2. 第二军医大学附属长海医院肾内科,上海,200433 |
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| 摘 要： | 目的 构建大鼠血红素氧合酶-1(HO-1)真核表达载体,并以该重组表达载体体外转染培养的大鼠腹膜间皮细胞(RPMCs).方法 从SD大鼠脾脏中提取总RNA,并经RT-PCR扩增HO-1基因的CDS区全长片段,将PCR产物克隆至pMD-18T载体,BamH Ⅰ和Kpn Ⅰ双酶切后获取HO-1片段,用T4DNA连接酶将HO-1片段与双酶切后的真核表达载体pcDNA3.1(-)连接,构建大鼠HO-1真核表达载体pcDNA3.1(-)-HO-1.酶切鉴定和测序验证后,利用脂质体介导将重组质粒转染原代培养的RPMCs,通过RT-PCR和Western blotting检测RPMCs中HO-1的表达.结果 成功克隆了大鼠HO-1基因并构建了其真核表达载体pcDNA3.1(-)-HO-1,酶切鉴定证实基因正确地插入表达载体中,并经DNA测序验证.pcDNA3.1(-)-HO-1转染RPMCs后,经RT-PCR和Western blotting检测,HO-1在RPMCs中获得高效表达.结论 HO-1基因真核表达载体的成功构建以及HO-1在RPMCs中的高效表达,为进一步研究HO-1在腹膜透析所致RPMCs损伤中的作用奠定了基础.
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| 关 键 词： | 血红素氧合酶-1 表达载体 腹膜间皮细胞 大鼠 |
Construction of eukaryotic expression vector of heme oxygenase-1 and its expression in rat peritoneal mesothelial cells |
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| ZHU Chun
,
GUO Zhi-yong
,
LIU Yi-sheng
,
HUANG Hai-dong
,
JIANG Geng-ru.Construction of eukaryotic expression vector of heme oxygenase-1 and its expression in rat peritoneal mesothelial cells[J].Journal of Shanghai Jiaotong University:Medical Science,2013,33(4):425-429. |
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| Authors: | ZHU Chun GUO Zhi-yong LIU Yi-sheng HUANG Hai-dong JIANG Geng-ru |
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