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树鼩CD4蛋白多克隆抗体的制备及检测
引用本文:卢孔杰,徐婧雯,张雪梅,吴忠香,任芳芳,马娜,巩蔚,严丽蔚,朱文兵.树鼩CD4蛋白多克隆抗体的制备及检测[J].实验动物与比较医学,2016(4):243-249.
作者姓名:卢孔杰  徐婧雯  张雪梅  吴忠香  任芳芳  马娜  巩蔚  严丽蔚  朱文兵
作者单位:中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所,云南省重大传染病疫苗研发重点实验室,昆明650118
基金项目:国家科技支撑计划项目(2014BAI01B01)
摘    要:目的 原核表达、纯化树鼩CD4蛋白并制备多克隆抗体,检测树鼩体内的CD4蛋白.方法 克隆树鼩CD4基因并连接到表达载体,构建重组质粒pET30a(+)-CD4和pGEX-5X-1-CD4,表达并纯化重组蛋白His-CD4和GST-CD4,用不同佐剂弗氏佐剂、MF59和A1(OH)3]制备多抗,用Western blot法检测血清抗体特异性.结果 蛋白表达产物His-CD4和GST-CD4的相对分子质量分别约为53.5×103和70.0×103,纯化后蛋白浓度分别为600 μg/mL和1 mg/mL;三组佐剂均能诱导产生抗体,抗体几何平均滴度(Geometric Mean Titer,GMT)的比较结果为:弗氏佐剂组(GMT:97 420)>Al(OH)3佐剂组(GMT:67 202)>MF59佐剂组(GMT:55 128);其中弗氏佐剂组显著高于原蛋白组(P<0.001);Al(OH)3组显著高于原蛋白组(P<0.01);而MF59组显著高于原蛋白组(P<0.05).结论 制备了特异性良好的小鼠抗血清,能够特异性地结合树鼩的CD4蛋白.为下一步本实验室制备CD4单克隆抗体、CD4蛋白分子的功能研究以及树鼩的病毒感染模型等免疫相关实验的进行提供了基础.

关 键 词:树鼩  CD4蛋白  表达  纯化  多克隆抗体

Preparation and Determination of CD4 Polyclonal Antibodies of Tree Shrew
Abstract:
Keywords:Tree shrew  CD4 Protein  Expression  Purification  Polyclonal antibody
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