转染DJ-J和DJ-1^L166P基因的NIH3T3细胞中tau基因表达的研究 |
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作者姓名: | 张梅英 蔺美娜 杨葳 董婉维 李兆阳 王惟 郑志红 王禄增 |
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作者单位: | 中国医科大学实验动物部,辽宁省转基因重点实验室,沈阳110001 |
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摘 要: | 目的在转染pEGFP-DJ-1和pEGFP-DJ-1^L166P质粒的NIH3T3细胞中进行tau基因表达与DJ-1基因相关性的研究,为进一步建立DJ-1和DJ-1^L166P转基因小鼠模型及在动物整体水平研究DJ-1基因功能和帕金森病发病机制提供实验基础。方法采用RT-PCR的方法从人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)总RNA反转录获得DJ-1cDNA片段,采用突变试剂盒将第166位氨基酸突变,分别构建pEGFP-DJ-1和pEGFP-DJ-1^L166P重组表达载体,采用脂质体转染的方法分别将pEGFP-DJ-1、pEGFP-DJ-1^L166P、pEGFP-C3质粒转染NIH3T3细胞并用G418压力筛选稳定克隆,对获得的三种转染细胞在转录水平和蛋白质水平进行tau基因表达的检测。结果pEGFP—DJ-1、pEGFP-DJ-1^L166P、pEGFP—C3质粒转染NIH3T3细胞G418筛选后,分别获得6、2、9个阳性细胞克隆,RT—PCR及western blot方法进行tau基因表达检测,结果均显示pEGFP—DJ-1质粒转染组tau表达低于pEGFP—C3质粒转染组,而pEGFP—DJ-1^L166P质粒转染组tau表达则高于pEGFP—C3质粒转染组,实验结果统计学分析均具有明显差异(P〈0.05)。结论在转录水平及蛋白质水平,DJ-1基因使tau基因的表达下降,而DJ-1^L166P使tau基因表达上升。在NIH3T3细胞中tau基因表达与DJ-1基因具有一定的相关性。
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关 键 词: | DJ-1 tau 帕金森氏病 基因 |
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