SIRT1增强青光眼小梁网细胞DSBs修复能力及抗细胞衰老的研究

目的 研究Ⅲ类组蛋白去乙酰化酶SIRT1与青光眼小梁网细胞（GTM）DNA双链损伤（DSBs）修复能力及细胞衰老之间的关系。方法 首先通过RT-PCR和Western blot检测正常小梁网细胞（HTM）与GTM之间SIRT1表达的差异；然后将HTM、GTM细胞分别分为4组，白藜芦醇组（0.5 μmol/L Res干预24 h）、SIRT1-ShRNA组（构建成功的SIRT1干扰质粒转染细胞）、microRNA34a组（构建成功的microRNA34a表达质粒转染细胞）以及Control组，通过Western blot检测各组细胞中SIRT1表达水平的差异；SA-β-Gal衰老染色检测连续生长10 h、32 h、3 d、6 d后各组细胞的衰老变化；中性彗星电泳检测经1.33 mol/L H2O2液处理0 h、2 h时各组细胞中DNA双链损伤情况；Western blot检测1.33 mol/L H2O2液处理0 h、1 h、2 h后，各组细胞中γ-H2AX表达的变化情况。结果 HTM及GTM细胞中均存在SIRT1的表达，且HTM中的表达要高于GTM；HTM、GTM细胞各组内比较发现，SIRT1蛋白的表达水平呈Res组＞Control组＞microRNA34a组＞SIRT1-ShRNA组趋势；SA-β-Gal衰老染色则发现在相同时间点，GTM细胞的衰老程度均高于HTM细胞，而在同一类细胞中，SIRT1-ShRNA组细胞最先表现出衰老，且随着时间的延长，其衰老程度也最为严重，Res干预细胞24 h后，能明显延缓细胞衰老。中性彗星电泳检测表明经氧化剂处理后，GTM组双链DNA的损伤情况比HTM组严重，并呈现出SIRT1-ShRNA组>microRNA34a组>Control组>Res组的趋势，γ-H2AX表达量的检测结果与中性彗星电泳的结果一致。结论 SIRT1表达活性的下调可能是诱发青光眼的因素之一；Res能显著增强HTM细胞中SIRT1的表达活性，上调的SIRT1能促进HTM细胞DNA双链损伤修复的能力，维持细胞基因组的稳定性，进而减缓细胞的衰老。

SIRT1 Promote GTM Cell DSBs Repair and Resist Cellular Senescence