补肾活血方诱导大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的实验研究

目的观察补肾活血方对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)向成骨细胞分化的情况,从而为其治疗骨质疏松症提供细胞生物学研究依据。方法 SPF健康雌性SD大鼠,采用密度梯度离心法分离骨髓间质干细胞,差速贴壁法进行纯化,细胞培养至第3代(P3),应用流式细胞术鉴定BMSCs纯度并分选纯化细胞,纯化过的细胞经补肾活血方诱导1天,3天和7天,在不同时间点进行碱性磷酸酶(ALP)染色鉴定成骨细胞,经茜素红染色鉴定钙结节。结果 P3含有CD44的细胞数占总数的96. 3%,CD29的细胞数占总数的77. 1%,说明培养的细胞中骨髓间充质干细胞的纯度较高,经补肾活血方诱导后可见细胞由梭型变成铺路石样,体积增大,细胞成簇状生长。经碱性磷酸酶鉴定可见胞浆着蓝色,有典型成骨细胞的表达。经茜素红染色,可见成簇的细胞呈红色钙结节样。结论补肾活血方的作用靶点可能是通过促进BMSCs向成骨的分化,从而起到防治骨质疏松的作用。