复肝丸调控miR-424表达抑制肝窦内皮细胞血管新生的体外研究 |
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引用本文: | 王清兰,张风,雷扬,刘成海,陶艳艳.复肝丸调控miR-424表达抑制肝窦内皮细胞血管新生的体外研究[J].上海中医药杂志,2020,54(1):68-73, 96. |
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作者姓名: | 王清兰 张风 雷扬 刘成海 陶艳艳 |
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作者单位: | 上海中医药大学附属曙光医院肝病研究所 上海201203;上海中医药大学基础医学院伤寒金匮教研室 上海201203;上海中医药大学附属曙光医院肝病研究所 上海201203;上海中医药大学附属曙光医院肝病研究所 上海201203;上海市中医临床重点实验室 上海201203;肝肾疾病病证教育部重点实验室(上海中医药大学) 上海201203 |
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基金项目: | 国家自然科学基金资助项目(81270053,81573810)上海市自然科学基金项目(16ZR1437800);上海市自然科学基金项目(16ZR1437800) |
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摘 要: | 目的观察复肝丸调控miR-424表达以抑制肝窦内皮细胞血管新生的作用及其机制。方法以不同剂量(0~2 000 mg/L)的复肝丸与人肝窦内皮细胞(HHSEC)共孵育,CCK8法检测复肝丸对细胞活力的影响,分析复肝丸对细胞无毒性作用的剂量范围,并以此作为后续药效及机制评价的剂量。以CoCl_2诱导HHSEC血管新生模型,分为正常组、模型组、miR-424抑制剂组及复肝丸组,除正常组外,其余各组以CoCl_2诱导细胞血管新生,miR-424抑制剂组及复肝丸组分别以miR-424抑制剂及复肝丸(200 mg/L)与细胞共孵育24 h。采用CCK8法检测细胞活力与增殖情况;Transwell观察细胞迁移变化情况;Matrigel管腔生成实验评价细胞管腔形成情况;定量RT-PCR检测miR-424、HIF-1α、vWF、CD31基因表达;Western blot法检测HIF-1α、vWF、CD31蛋白表达。结果复肝丸剂量小于400 mg/L对HHSCE无明显细胞毒性。与正常组比较,200μmol/L CoCl_2可诱导肝窦内皮细胞缺氧损伤模型,且模型组miR-424、HIF-1α表达增加,细胞迁移和管腔生成增多,vWF、CD31表达增加(P0.01);与模型组比较,miR-424抑制剂与200 mg/L复肝丸干预后,miR-424与HIF-1α表达均不同程度降低,细胞迁移和管腔生成受抑制,vWF、CD31表达降低(P0.01);且复肝丸组综合疗效与miR-424抑制剂相当。结论复肝丸具有良好的抑制肝窦内皮细胞血管新生的作用,其作用机制与抑制miR-424表达相关。
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关 键 词: | miRNA-424 血管新生 肝窦内皮细胞 复肝丸 |
收稿时间: | 2019/8/18 0:00:00 |
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