| 灰毡毛忍冬LmC3H1基因的克隆及表达模式与绿原酸含量相关性分析 |
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| 引用本文： | 陈娅,王安琪,刘聪,龙雨青,刘霞,曾娟,李灿,刘湘丹,周日宝.灰毡毛忍冬LmC3H1基因的克隆及表达模式与绿原酸含量相关性分析[J].中国实验方剂学杂志,2020,26(9):167-175. |
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| 作者姓名： | 陈娅 王安琪 刘聪 龙雨青 刘霞 曾娟 李灿 刘湘丹 周日宝 |
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| 作者单位： | 湖南中医药大学 药学院, 长沙 410208,湖南中医药大学 药学院, 长沙 410208,湖南中医药大学 药学院, 长沙 410208,湖南中医药大学 药学院, 长沙 410208,湖南中医药大学 药学院, 长沙 410208,湖南中医药大学 药学院, 长沙 410208,湖南中医药大学 药学院, 长沙 410208,湖南中医药大学 药学院, 长沙 410208;湖南省中药饮片标准化及功能工程技术研究中心, 长沙 410208,湖南中医药大学 药学院, 长沙 410208 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金面上项目（81673546）；国家自然科学基金青年科学基金项目（81203007）；湖南省自然科学基金项目（2017JJ3237）；湖南省科技厅重点研发项目（2017SK2124）；湖南省教育厅科学研究项目（16B193）；湖南省高等学校2011协同创新中心项目（湘教通[2015]351）；湖南中医药大学“十三五”科技发展与一流学科建设项目（校行科字[2018]3号）；湖南中医药大学大学生研究性学习和创新性实验计划立项项目（校行教字[2017]7号-19） |
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| 摘 要： | 目的:以灰毡毛忍冬为材料,克隆对-香豆酸3-羟化酶(LmC3H1)基因,进行生物信息学和表达模式分析,结合绿原酸含量,研究推测灰毡毛忍冬LmC3H1基因的功能。方法:通过逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和RACE技术克隆LmC3H1基因的全长c DNA序列,对该序列进行生物信息学分析,并利用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)和HPLC分别测定灰毡毛忍冬茎、叶及不同花期花中LmC3H1的相对表达量及绿原酸含量。结果:克隆得LmC3H1(Gen Bank:MN177695)基因,开放阅读框(ORF)长度为1 533 bp,编码510个氨基酸,推测其分子式为C_(2618)H_(4134)N_(718)O_(727)S_(22),相对分子质量为58 005.32,等电点8.92,为亲水性蛋白,定位于叶绿体中,具有跨膜区域LLLIPAVLFLISLVYPLI,含有细胞色素P450的保守结构域CYTOCHROME_P450(422-433 aa);Real-time PCR结果显示,LmC3H1在灰毡毛忍冬茎、叶及不同花期花有不同程度的表达,其中在花发育阶段,白色花蕾期相对表达量最高,花蕾初期及白色开花期次之;白色花蕾期花与茎、叶比,花的相对表达量最高,叶的最低;HPLC结果显示,从绿白色花蕾期到金黄色开花期绿原酸含量呈上升趋势,金黄色开花期含量最高,不同器官中,花中绿原酸最高,茎最低。结论:克隆得到灰毡毛忍冬LmC3H1基因,推测LmC3H1可能参与灰毡毛忍冬花绿原酸的生物合成。该研究为进一步研究该基因的功能及探究灰毡毛忍冬绿原酸生物合成和调节机制提供了依据,同时为遗传改良灰毡毛忍冬品质奠定了基础。
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| 关 键 词： | 灰毡毛忍冬 对-香豆酸3-羟化酶(C3H) 基因克隆 生物信息学 表达分析 含量测定 |
| 收稿时间： | 2019/10/8 0:00:00 |
Cloning and Expression Patterns of LmC3H1 Gene in Lonicera macranthoides and Its Correlation with Chlorogenic Acid Content |
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| CHEN Y,WANG An-qi,LIU Cong,LONG Yu-qing,LIU Xi,ZENG Juan,LI Can,LIU Xiang-dan and ZHOU Ri-bao.Cloning and Expression Patterns of LmC3H1 Gene in Lonicera macranthoides and Its Correlation with Chlorogenic Acid Content[J].China Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2020,26(9):167-175. |
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| Authors: | CHEN Y WANG An-qi LIU Cong LONG Yu-qing LIU Xi ZENG Juan LI Can LIU Xiang-dan and ZHOU Ri-bao |
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| Institution: | School of Pharmacy, Hunan University of Chinese Medicine, Changsha 410208, China,School of Pharmacy, Hunan University of Chinese Medicine, Changsha 410208, China,School of Pharmacy, Hunan University of Chinese Medicine, Changsha 410208, China,School of Pharmacy, Hunan University of Chinese Medicine, Changsha 410208, China,School of Pharmacy, Hunan University of Chinese Medicine, Changsha 410208, China,School of Pharmacy, Hunan University of Chinese Medicine, Changsha 410208, China,School of Pharmacy, Hunan University of Chinese Medicine, Changsha 410208, China,School of Pharmacy, Hunan University of Chinese Medicine, Changsha 410208, China;Hunan Traditional Chinese Medicine Piece Standardization and Function Technology Research Center, Changsha 410208, China and School of Pharmacy, Hunan University of Chinese Medicine, Changsha 410208, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Lonicera macranthoides p-coumaroyl quinate/shikimate 3''-hydroxylase(C3H) gene cloning bioinformatic expression analysis determination |
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