| 沉香DNA的提取及其ITS2-PCR体系的优化 |
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| 引用本文： | 刘少烽,陈晓东,朱爽,陈晓颖,钟兆健,章卫民,高晓霞.沉香DNA的提取及其ITS2-PCR体系的优化[J].中国实验方剂学杂志,2015,21(2):7-11. |
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| 作者姓名： | 刘少烽 陈晓东 朱爽 陈晓颖 钟兆健 章卫民 高晓霞 |
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| 作者单位： | 广东药学院 药科学院, 广州 510006;广东药学院 药科学院, 广州 510006;广东药学院 生命科学与生物制药学院, 广州 510006;广东药学院 药科学院, 广州 510006;广东药学院 药科学院, 广州 510006;广东省微生物研究所, 省部共建华南应用微生物国家重点实验室, 广东省菌种保藏 与应用重点实验室, 广东省微生物应用新技术公共实验室, 广州 510070;广东药学院 药科学院, 广州 510006 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(81102418);广东省科技计划项目(2012A030100014);广东省科学院野外科学实验站基金项目(Sytz201204) |
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| 摘 要： | 目的:建立沉香的总DNA提取方法及r DNA第二内转录间隔区序列(ITS2)聚合酶链式反应(PCR)扩增体系。方法:分别采用改良的CTAB法、改良的CTAB法联合DNA提取试剂盒法及DNA提取试剂盒法提取沉香总DNA,利用通用引物ITS2P1/ITS2P2扩增r DNA ITS2目的片段,通过正交试验优选沉香的PCR扩增条件并对目的片段进行测序。结果:改良的CTAB法联合DNA提取试剂盒法提取总DNA的A260 nm/A280 nm1.79,质量浓度350 mg·L-1,PCR扩增目的片段产率最高。不同因素水平对沉香ITS2-PCR反应的影响顺序为模板DNA引物Taq DNA聚合酶d NTP。最佳反应体系为20μL体系,DNA模板40 ng,引物0.2 mmol·L-1,d NTP 0.5 mmol·L-1,Taq DNA聚合酶1.5 U。测序获得的目前片段长度230 bp,与Gen Bank中瑞香科沉香属白木香序列相似性100%。结论:CTAB法联合DNA试剂盒法可简单、快速获得高质量沉香总DNA,正交试验可快速获得ITS2目的片段,为沉香的分子鉴定和系统发育分析提供参考。
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| 关 键 词： | 沉香 DNA提取 ITS2 聚合酶链式反应 |
| 收稿时间： | 2014/7/13 0:00:00 |
Extraction of DNA from Aquilariae Lignum Resinatum and Optimization of Its ITS2-PCR System |
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| LIU Shao-feng,CHEN Xiao-dong,ZHU Shuang,CHEN Xiao-ying,ZHONG Zhao-jian,ZHANG Wei-min and GAO Xiao-xia.Extraction of DNA from Aquilariae Lignum Resinatum and Optimization of Its ITS2-PCR System[J].China Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2015,21(2):7-11. |
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| Authors: | LIU Shao-feng CHEN Xiao-dong ZHU Shuang CHEN Xiao-ying ZHONG Zhao-jian ZHANG Wei-min and GAO Xiao-xia |
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| Institution: | College of Pharmacy, Guangdong Pharmaceutical University, Guangzhou 510006, China;College of Pharmacy, Guangdong Pharmaceutical University, Guangzhou 510006, China;College of Life Science and Bio-pharmacolotical, Guangdong Pharmaceutical University, Guangzhou 510006, China;College of Pharmacy, Guangdong Pharmaceutical University, Guangzhou 510006, China;College of Pharmacy, Guangdong Pharmaceutical University, Guangzhou 510006, China;Guangdong Institute of Microbiology, State Key Laboratory of Applied Microbiology Southern China, Guangdong Provincial Key Laboratory of Microbial Culture Collection and Application, Guangdong Open Laboratory of Applied Microbiology, Guangzhou 510070, China;College of Pharmacy, Guangdong Pharmaceutical University, Guangzhou 510006, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Aquilariae Lignum Resinatum DNA extraction ITS2 polymerase chain reaction |
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