| 欧洲花楸糖基转移酶基因的全长克隆与表达分析 |
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| 引用本文： | 李佳兴,莫歌,周良云,刘亚辉,蒋靖怡,谭宇萍,唐金富,郭兰萍.欧洲花楸糖基转移酶基因的全长克隆与表达分析[J].中国实验方剂学杂志,2019,25(5):167-172. |
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| 作者姓名： | 李佳兴 莫歌 周良云 刘亚辉 蒋靖怡 谭宇萍 唐金富 郭兰萍 |
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| 作者单位： | 广东药科大学 中药学院, 广州 510006,西藏藏医学院, 拉萨 850000,广东药科大学 中药学院, 广州 510006,中国中医科学院 中药资源中心, 道地药材国家重点实验室培育基地, 北京 100700,中国中医科学院 中药资源中心, 道地药材国家重点实验室培育基地, 北京 100700,广东药科大学 中药学院, 广州 510006,中国中医科学院 中药资源中心, 道地药材国家重点实验室培育基地, 北京 100700,广东药科大学 中药学院, 广州 510006 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目（81703655）；中央本级重大增减支项目（2060302）；中国中医科学院重点领域项目（ZZ10-27） |
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| 摘 要： | 目的:研究欧洲花楸植保素糖基化修饰的相关基因,从欧洲花楸悬浮细胞中克隆糖基转移酶(glycosyltransferase,GT)基因,进行序列分析和原核表达。方法:基于欧洲花楸转录组数据设计特异性引物,克隆得到2条Sa UGTs基因的c DNA序列,构建HIS-MBP-pET28a-SaUGTs原核表达载体,诱导表达Sa UGTs重组蛋白。结果:克隆得到2条糖基转移酶基因Sa UGT1和Sa UGT2序列,完整开放阅读框为1 458 bp和1 431 bp,分别编码485和476个氨基酸,相对分子质量为54. 27 k Da和53. 49 k Da,理论等电点为5. 50和5. 63。生物信息学分析显示,无信号肽,含有糖基转移酶家族保守结构域(PSPG)。系统进化结果显示Sa UGT1和Sa UGT2蛋白与拟南芥UGT85家族亲缘关系较近。实时荧光定量PCR检测显示,欧洲花楸悬浮细胞经酵母提取物(YE)诱导后,Sa UGT1和Sa UGT2的相对表达量明显上调,分别在24 h和12 h达到最大值。通过IPTG诱导,在大肠埃希菌中成功表达Sa UGT1和Sa UGT2重组蛋白,并得到了纯化的重组蛋白。结论:该研究首次在欧洲花楸中克隆得到糖基转移酶基因,并成功构建了原核表达载体,为进一步研究该类基因的功能奠定了基础。
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| 关 键 词： | 欧洲花楸 糖基转移酶 全长克隆 表达分析 |
| 收稿时间： | 2018/7/19 0:00:00 |
Full-length Cloning and Protein Expression Analysis of Glycosyltransferases Gene SaUGT1/SaUGT2 in Sorbus aucuparia |
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| LI Jia-xing,MO Ge,ZHOU Liang-yun,LIU Ya-hui,JIANG Jing-yi,TAN Yu-ping,TANG Jin-fu and GUO Lan-ping.Full-length Cloning and Protein Expression Analysis of Glycosyltransferases Gene SaUGT1/SaUGT2 in Sorbus aucuparia[J].China Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2019,25(5):167-172. |
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| Authors: | LI Jia-xing MO Ge ZHOU Liang-yun LIU Ya-hui JIANG Jing-yi TAN Yu-ping TANG Jin-fu and GUO Lan-ping |
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| Institution: | School of Traditional Chinese Medicine, Guangdong Pharmaceutical University, Guangzhou 510006, China,Tibetan Traditional Medical College, Lhasa 850000, China,School of Traditional Chinese Medicine, Guangdong Pharmaceutical University, Guangzhou 510006, China,State Key Laboratory of Dao-di Herbs Breeding Base, National Resources Center for Chinese Materia Medica, China Academy of Chinese Medical Sciences, Beijing 100700,State Key Laboratory of Dao-di Herbs Breeding Base, National Resources Center for Chinese Materia Medica, China Academy of Chinese Medical Sciences, Beijing 100700,School of Traditional Chinese Medicine, Guangdong Pharmaceutical University, Guangzhou 510006, China,State Key Laboratory of Dao-di Herbs Breeding Base, National Resources Center for Chinese Materia Medica, China Academy of Chinese Medical Sciences, Beijing 100700 and School of Traditional Chinese Medicine, Guangdong Pharmaceutical University, Guangzhou 510006, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Sorbus aucuparia glycosyltransferases full-length cDNA cloning expression analysis |
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