基于肠黏膜屏障及TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路探讨燮和饮改善PCOS-IR小鼠炎症反应的影响

目的 探讨燮和饮对改善肥胖型多囊卵巢综合征胰岛素抵抗（PCOS-IR），减缓炎症反应的可能作用机制。方法 将60只SPF级雌性C57BL/6J小鼠随机抽取10只，并设为正常组，其余小鼠均采用粪菌混悬液（2 g·kg^-1）联合来曲唑溶液（0.002 g·kg^-1）灌胃4周建立PCOS-IR模型。将模型复制成功的动物随机分为模型组，二甲双胍组（0.25 g·kg^-1）及燮和饮低、中、高剂量组（10，20，40 g·kg^-1），给予相应剂量的药物灌胃，每天1次，连续治疗4周。除空白组外，其余各组小鼠在治疗期间持续灌胃粪菌混悬液和来曲唑溶液以维持模型。动物每周称1次体质量；治疗结束后测量空腹血糖（FBG）；酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清睾酮（T），促卵泡生成素（FSH），促黄体生成素（LH），空腹胰岛素（FINS）水平，计算LH/FSH及胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）值；摘取子宫和双侧卵巢称质量后固定，苏木素-伊红（HE）染色观察卵巢组织病理形态学变化；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测小鼠结肠组织中Toll样受体4/核转录因子-κB/NOD样受体蛋白3（TLR4/NF-κB/NLRP3）信号通路及下游炎症相关因子半胱氨酸天冬氨酸水解酶-1（Caspase-1），白细胞介素-1β（IL-1β），紧密连接蛋白-1（ZO-1），闭合蛋白（occludin）表达水平。结果 与正常组比较，模型组小鼠体质量显著升高（P<0.01）；血清FBG，FINS和HOMA-IR明显升高（P<0.05）；血清T，LH/FSH显著升高（P<0.01）；子宫脏器比显著降低（P<0.01），卵巢脏器比显著升高（P<0.01），镜下可见卵巢中囊性扩张卵泡及闭锁小卵泡数量明显增多，黄体数量显著减少，卵泡颗粒细胞层减少，卵泡膜显著增厚；结肠组织中ZO-1，occludin的相对表达量显著下调（P<0.01），炎症相关蛋白TLR4，NF-κB，NLRP3，Caspase-1，IL-1β表达量明显上调（P<0.05）。与模型组比较，燮和饮低、中、高剂量组小鼠体质量显著降低（P<0.01）；燮和饮中、高剂量组血清FBG，FINS，HOMA-IR明显降低（P<0.05）；高剂量组血清T，LH/FSH显著降低（P<0.01）；卵巢脏器比明显降低（P<0.05），子宫脏器比显著升高（P<0.05），卵巢中囊状卵泡明显减少，内见黄体，卵巢颗粒细胞正常排列，卵泡膜略增厚；高剂量组结肠组织TLR4，NF-κB，NLRP3，Caspase-1，IL-1β蛋白表达显著下调（P<0.01），ZO-1，occludin蛋白表达量显著上调（P<0.01）。结论 燮和饮调控肠道TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路，减少下游炎症因子释放，通过重建肠黏膜屏障功能及抑制肠道炎症反应，改善肥胖和IR，从而逆转PCOS-IR。