基于高通量测序技术探讨补骨脂宁治疗肺癌的潜在机制

目的 探索补骨脂宁治疗肺癌的潜在分子机制。方法 利用不同浓度的补骨脂宁干预A549细胞，采用噻唑蓝（MTT）法、高通量测序技术、趋势分析、基因本体（GO）功能注释和京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集分析的方法分别检测A549细胞的增殖能力，筛选补骨脂宁抑制A549细胞增殖的关键基因以及关键通路，并利用实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）对测序的结果进行验证，探讨补骨脂宁治疗肺癌的潜在机制。结果 补骨脂宁可明显抑制A549细胞的增殖，并调节细胞内4 364个基因的表达。通过趋势分析发现这些差异基因分别聚类在20个基因表达模式中，其中前4个基因表达模式具有统计学意义，且均为显著下调趋势，说明补骨脂宁主要通过抑制某些基因的表达，发挥抗增殖的作用；通过组间差异基因的比较，笔者发现随着补骨脂宁浓度的增加，下调基因也随之增加，细胞增殖趋势越加减弱，与趋势分析结果一致，因此，笔者着重分析高浓度补骨脂宁干预组的278个差异基因，GO分子功能结果显示，补骨脂宁主要改变细胞和代谢的过程，KEGG通路富集结果显示，补骨脂宁主要通过影响类固醇生物合成、脂肪酸代谢、不饱和脂肪酸的生物合成、酮体的合成与降解和类固醇激素的合成等通路发挥作用，因此选取显著富集于脂质代谢通路并且P<0.01的差异表达基因LSS，硬脂酰基辅酶A脱氢酶（SCD），3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A合酶基因（HMGCS1），血管生成素样蛋白4（ANGPTL4）进行验证，Real-time PCR显示补骨脂宁可以抑制LSS，SCD，HMGCS1的mRNA表达，升高ANGPTL4的mRNA表达，与测序结果基本一致。结论 补骨脂宁主要通过靶向脂质代谢途径相关的代谢因子，抑制A549细胞增殖，从而达到治疗肺癌的作用。

Exploration of Potential Mechanisms of Corylin Against Lung Cancer By High-throughput Sequencing