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天门冬ISSR分子标记技术的建立与体系优化
引用本文:欧立军,颜旺,廖亚西,梁云浩,佘朝文.天门冬ISSR分子标记技术的建立与体系优化[J].中草药,2011,42(2):353-257.
作者姓名:欧立军  颜旺  廖亚西  梁云浩  佘朝文
作者单位:1. 民族药用植物资源研究与利用湖南省重点实验室,湖南,怀化,418008;湘西药用植物与民族植物学湖南省高校重点实验室,湖南,怀化,418008;怀化学院,生命科学系,湖南,怀化,418008
2. 怀化学院,生命科学系,湖南,怀化,418008
基金项目:湖南省高校创新平台开放基金,湖南省科技计划重点项目
摘    要:目的建立并优化天门冬ISSR-PCR反应体系和扩增程序,为探讨天门冬种质间遗传多样性提供依据。方法采用单因子试验和正交设计法,研究Mg2+、dNTP、引物、Taq DNA聚合酶、模板DNA、延伸时间及循环次数对PCR扩增的影响。结果天门冬ISSR-PCR的最佳反应体系为25μL的反应体系中含模板DNA 40 ng、Mg2+1.25 mmol/L、dNTP 320μmol/L、引物1.2μmol/L、Taq DNA聚合酶1.5 U。在此基础上,从50条引物中筛选出13条扩增稳定、多态性丰富的ISSR引物,并通过梯度PCR试验,确定引物最佳退火温度。结论建立的天门冬ISSR-PCR反应体系,经过17份天门冬种质检验,证明该体系稳定可靠,可用于天门冬遗传分析。

关 键 词:天门冬  ISSR-PCR  正交设计  单因子试验  遗传分析
收稿时间:2010/5/30 0:00:00

Establishment and optimization of ISSR-PCR reaction system in Asparagus cochinchinensis
OU Li-jun,YAN Wang,LIAO Ya-xi,LIANG Yun-hao and SHE Chao-wen.Establishment and optimization of ISSR-PCR reaction system in Asparagus cochinchinensis[J].Chinese Traditional and Herbal Drugs,2011,42(2):353-257.
Authors:OU Li-jun  YAN Wang  LIAO Ya-xi  LIANG Yun-hao and SHE Chao-wen
Institution:1,2,3 1.Key Laboratory of Hunan Province for Study and Utilization of Ethnic Medicinal Plant Resources,Huaihua 418008,China 2.Key Laboratory of Hunan Higher Education for Hunan-western Medicinal Plant and Ethnobotany,Huaihua 418008,China 3.Department of Life Sciences,Huaihua University,Huaihua 418008,China
Abstract:
Keywords:ISSR-PCR
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