地拉罗司对小鼠成肌细胞C2C12生物活性的影响

目的模拟体内肌少症病理环境,观察铁螯合剂地拉罗司(deferasirox,DFS)对小鼠成肌细胞C2C12生物学活性的影响。方法构建模拟体内骨骼肌营养缺乏的细胞培养模型:体外培养小鼠成肌细胞C2C12,细胞分为3组:对照组、无血清培养基组和无血清培养基加DFS (10μmol/L)共孵育组,CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡; C2C12细胞在马血清作用下诱导分化,镜下观察细胞形态并计数骨骼肌肌管数目;构建模拟体内骨骼肌炎性损伤的细胞培养模型:C2C12细胞在马血清诱导下分化后分为3组:对照组、肿瘤坏死因子-α(tumour necrosis factor,TNF-α,10 ng/m L)干预组和TNF-α(10 ng/m L)加DFS (10μmol/L)共孵育组,丙二醛(malondialdehyde,MDA)检测试剂盒和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)试剂盒分别检测细胞MDA和GSH-Px水平,实时定量PCR法检测细胞肌球蛋白重链(myosin heavy chain,MyHC) mRNA和肌细胞生成素(myogenin,MyOG) mRNA的表达水平,镜下观察细胞形态并计数骨骼肌肌管数目。结果对照组、无血清培养基组和无血清培养基加DFS共孵育组细胞增殖最终OD值分比为2. 74±0. 01、0. 43±0. 01和0. 83±0. 01,细胞凋亡率分别为(7. 45±1. 73)%、(37. 82±2. 30)%和(25. 73±1. 42)%,肌管计数分别为9. 10±1. 45、1. 00±0. 33和3. 80±1. 14。C2C12细胞在无血清培养条件下增殖下降、凋亡率增加、细胞肌管形成减少,DFS干预后细胞增殖升高、凋亡率下降、肌管形成增加,均P0. 05。对照组、TNF-α干预组和TNF-α加DFS共孵育组细胞内MDA含量分别为(1. 57±0. 01)、(3. 33±0. 14)和(2. 01±0. 19) nmol/L,GSH-Px含量分别为85. 44±7. 92、36. 26±7. 48和118. 50±17. 89,MyHC mRNA的表达量分别为1、0. 60±0. 14和1. 36±0. 13,MyOG mRNA的表达量分别为1、0. 88±0. 06和1. 57±0. 16,肌管计数分别为4. 30±1. 50、3. 30±0. 67和5. 30±2. 26。C2C12细胞诱导分化后,在TNF-α干预下,细胞MDA含量增加(P0. 05)、GSH-Px含量下降(P0. 05); DFS干预后细胞MDA含量下降(P0. 05)、GSH-Px含量增加(P0. 05),MyHC和MyOG mRNA表达上升(P0. 05),肌管数目形成增加(P0. 05)。结论 DFS可逆转C2C12细胞在营养缺乏和炎性损伤状态下的部分生物学活性指标的下降。