microRNA-21靶向调控Wnt2基因对肝癌细胞HepG2增殖与迁移的影响

目的探讨分析microRNA-21(miR-21)靶向调控Wnt2基因对肝癌细胞HepG2增殖与迁移的影响。方法采用实时荧光定量PCR法检测肝癌细胞HepG2及正常肝细胞株LO2 miR-21的表达情况。对HepG2细胞转染miR-21抑制剂,分析转染后抑制剂组与对照组miR-21的表达情况、细胞增殖、迁移及凋亡情况,检测两组细胞Wnt2蛋白表达水平,并采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-21与Wnt2基因的关系。计量资料两组间比较采用t检验。结果 HepG2细胞miR-21相对表达水平明显高于LO2细胞(1. 978±0. 035 vs 1. 586±0. 022,t=16. 424,P 0. 05)。转染miR-21抑制剂后,抑制剂组miR-21相对表达水平较对照组显著降低(0. 857±0. 017 vs 1. 684±0. 039,t=33. 669,P 0. 05)。转染miR-21抑制剂24、48、72 h后,抑制剂组HepG2细胞增殖能力均较对照组显著降低(P值均0. 05);抑制剂组穿过Tranwell小室的细胞数显著低于对照组(83. 72±15. 06 vs 147. 85±20. 64,t=4. 347,P 0. 05);抑制剂组细胞凋亡率明显高于对照组(25. 67%±3. 95%vs 10. 27%±2. 14%,t=5. 937,P 0. 05)。抑制剂组HepG2细胞的Wnt2相对表达水平明显低于对照组(0. 862±0. 127 vs 1. 306±0. 218,t=3. 048,P 0. 05)。TargetScan软件显示,miR-21抑制剂可显著抑制野生型Wnt2-3'UTR质粒转染细胞的荧光素酶活性(0. 972±0. 102 vs 0. 612±0. 092,t=4. 219,P 0. 05),而对突变型Wnt2-3'UTR质粒转染细胞的荧光素酶活性并无明显影响(0. 982±0. 093 vs 0. 911±0. 128,t=0. 972,P 0. 05)。结论抑制miR-21表达可有效抑制HepG2细胞增殖和迁移,促进HepG2细胞凋亡,并抑制Wnt信号通路的过度激活,可能成为肝癌治疗的潜在靶基因之一。