| 表达呼吸道合胞病毒融合前F蛋白的重组人5型腺病毒的构建 |
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| 引用本文： | 马亚林,柴鹏弟,王金冬,毛彤瑶,张鹏,李慧莹,段招军.表达呼吸道合胞病毒融合前F蛋白的重组人5型腺病毒的构建[J].中国人兽共患病杂志,2023(6):515-522. |
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| 作者姓名： | 马亚林 柴鹏弟 王金冬 毛彤瑶 张鹏 李慧莹 段招军 |
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| 作者单位： | 1. 甘肃中医药大学公共卫生学院;2. 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所国家卫生健康委员会医学病毒和病毒病重点实验室;3. 潍坊医学院 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(No.21934005)~~； |
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| 摘 要： | 目的 筛选并构建成功表达A亚型人呼吸道合胞病毒(Human Respiratory Syncytial Virus, HRSV)融合前构象F蛋白的重组人5型腺病毒(Recombinant Human type5 adenovirus, rHADV-5),为制备和研发HRSV重组腺病毒载体疫苗奠定基础。方法 在真核表达载体pcDNA3.1(+)上插入具有不同突变位点的HRSV F蛋白编码序列，利用融合前F蛋白单克隆抗体AM14和D25筛选HRSV F蛋白突变体；通过同源重组将筛选出的前构象F蛋白突变体编码序列插入非复制型人5型腺病毒载体，在HEK293细胞中进行重组病毒的包装和扩增，经氯化铯密度梯度法获得纯化的重组病毒；应用夹心ELISA法和Western blot鉴定F蛋白的表达及构象。结果 通过AM14和D25单克隆抗体筛选出了2个稳定维持在融和前构象的HRSV F蛋白序列(SC-3M和SC-5M)。将SC-3M和SC-5M编码序列插入非复制型人5型腺病毒载体，对两种重组人5型腺病毒(pAd5-SC-3M和pAd5-SC-5M)和空载体(pAd5-vector)纯化，病毒滴度分别达到...
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| 关 键 词： | 人5型腺病毒载体 人呼吸道合胞病毒 融合前F蛋白 HEK293细胞 |
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