结核分枝杆菌glcB基因原核表达载体的构建、表达和纯化

目的构建结核分枝杆glcB基因原核表达载体，并进行表达，纯化。方法用PcR扩增结核分枝杆菌glcB基因，并克隆入pTA2质粒。测序正确后，再亚克隆入pET30a（＋）质粒，构建pET30a（＋）：glcB重组体。结果以重组体转化BL21（DE3）后，经0．4mM异丙基硫代-β．D．半乳糖苷（IPTG）诱导，表达出分子量为92KD重组蛋白。SDS—PAGE分析显示，IPTG诱导4h重组蛋白的表达量最高。表达蛋白以包涵体形式存在于胞质中，表达量占全菌蛋白质的50％。经Ni-NTA柱纯化，获得纯度为90％的重组蛋白。结论成功地构建原核表达载体pET30a（＋）：glcB，并获得GIcB重组蛋白，为血清学诊断活动性结核病奠定了基础。