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| 天花粉蛋白突变体TCSFYY163-165CSA的构建表达与纯化 | |
| 引用本文： | 王媛,李友红,刘梓谕,时莹,徐志凯,许晶,黎志东.天花粉蛋白突变体TCSFYY163-165CSA的构建表达与纯化[J].海峡预防医学杂志,2012,28(3). |
| 作者姓名： | 王媛 李友红 刘梓谕 时莹 徐志凯 许晶 黎志东 |
| 作者单位： | 1. 第四军医大学基础部微生物学教研室,陕西西安,710032 2. 陕西省城固县人民医院病理科,陕西城固,723000 3. 陕西省疾病预防控制中心,陕西西安,710054 |
| 基金项目： | 陕西省社会发展攻关计划 |
| 摘 要： | 目的:构建天花粉蛋白(TCS)突变体基因,并在原核系统进行表达及纯化.方法:应用计算机预测TCS分子上可能的抗原决定簇(FYY163 - 165),并进行定点突变.以栝楼基因组DNA为模扳,经PCR扩增突变基因,与pRSET-A表达载体连接,转化感受态E.coli DH5α,提取质粒进行酶切鉴定及测序.将阳性重组质粒转化感受态E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达后,对表达产物进行Western blot法鉴定和Ni-NTA层析纯化.结果:构建了带有TCS突变体基因(TCSFYY163- 165CSA)的重组表达质粒,使目的蛋白在大肠杆菌中获得高效可溶性表达,表达产物经纯化后,得到均一的TCS突变体蛋白.结论:成功地构建了TCS突变体基因TCSFYY163 - 165CSA,并获得高效表达,为基因工程方法改造TCS提供了新的途径. |
| 关 键 词： | 天花粉蛋白 人类免疫缺陷病毒 定点突变 原核表达 纯化 |
Construction, expression and purification of trichosanthin mutant gene TCSFYY163-165CSA |
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| WANG Yuan , LI You-hong , LIU Zi-yu , SHI Ying , XU Zhi-kai , XU Jing , LI Zhi-dong.Construction, expression and purification of trichosanthin mutant gene TCSFYY163-165CSA[J].Strait Journal of Preventive Medicine,2012,28(3). | |
| Authors: | WANG Yuan LI You-hong LIU Zi-yu SHI Ying XU Zhi-kai XU Jing LI Zhi-dong |
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