寨卡病毒非结构蛋白1的真核表达纯化和免疫反应性鉴定

目的在HEK293F细胞中表达寨卡病毒(Zika Virus,ZKV)的非结构蛋白1(Nonstructural Protein 1,NS1),并分离纯化得到重组ZKNS1以及验证其免疫反应性。方法根据Gen Bank中的ZKNS1序列合成基因,在基因上下游分别引入信号肽和组氨酸标签,通过Not I和Xba I双酶切将基因克隆至pc DNA3.1(+)载体;将重组载体转染HEK293F细胞,重组蛋白用镍亲和柱层析纯化;免疫印迹法(Western blot)鉴定重组ZKNS1与寨卡病毒阳性人血清的免疫反应性。结果成功构建了ZKNS1的真核表达载体pc DNA3.1(+)-ZKNS1;在HEK293F细胞中重组ZKNS1以分泌形式表达于细胞培养上清中,经纯化后获得了纯度较高的分子量约为46k Da的重组蛋白;Western blot结果显示重组ZKNS1与寨卡病毒阳性人血清能发生特异性结合。结论成功构建ZKNS1的真核表达载体,获得了免疫反应性较高的纯化的重组ZKNS1,为进一步建立ELISA检测方法及制备单克隆抗体奠定了基础。