生物样品中酸性鞘磷脂酶活性测定

目的建立高效液相色谱测定生物样品中酸性鞘磷脂酶(ASM)活性的方法。方法收集成年昆明种小鼠血、尿、肝组织匀浆等生物样品,以BODIPY C12-Spm为荧光底物孵育2 h,采用ACQUITY BEH C18色谱柱,流动相为甲醇:13 mmol/L乙酸钠溶液=95∶5,流速0.8 m L/min,进样量10μL,荧光检测器检测,激发波长505 nm,发射波长540 nm。结果荧光产物B12-Cer在反向色谱解析中,4 min即可有效分离,在40~5 000 nmol/L范围内线性良好,相关系数为0.998 8,方法检出限为5.86 nmol/L;小鼠血、尿、肝细胞匀浆中ASM活性分别为(927.40±189.62)、(122.88±49.84)、(422.51±65.81)nmol/(μL·h)。结论基于荧光底物的高效液相色谱检测方法简便、稳定、灵敏度高,可用于微量生物样品中ASM活性检测。