CD3ζ链引入YRHQ基序可增强靶向HER2的CAR-T细胞的抗肿瘤活性

目的： 探讨在靶向HER2的CAR的CD3ζ链胞内区引入YRHQ基序对CAR-T细胞的特异性杀伤活性及免疫记忆形成的影响。 方法： 通过DNA合成获得包含靶向HER2的编码抗原受体H28ζ或H28ζ(YRHQ)的DNA片段，通过慢病毒载体将不同CAR的DNA片段分别转导健康人外周血T细胞，制备靶向HER2的H28ζ-CAR-T及H28ζ(YRHQ)-CAR-T细胞。扩增过程中对不同CAR-T细胞进行计数，FCM检测CAR的表达率。将CAR-T细胞分别与HER2阳性的SKOV3、MDA-MB-453或HER2阴性的MCF-7细胞共培养，LDH释放法检测其杀伤活性，ELISA法检测IL-2、IFN-γ和颗粒酶B的水平，WB法检测STAT3磷酸化水平及免疫检查点分子TIM-3和PD-1的表达，通过FCM检测CCR7、CD45RO的表达，分析CAR-T细胞的表型。 结果： H28ζ-CAR-T和H28ζ(YRHQ)-CAR-T细胞扩增能力较好，体外培养7 d时扩增4~5倍。H28ζ-CAR和H28ζ(YRHQ)-CAR表达率分别为（33.3±2.85）%和（28.30±3.2）%。H28ξ(YRHQ)-CAR-T细胞的杀伤活性较H28ζ-CAR-T细胞更高（P<0.05）。经HER2抗原刺激后，与T细胞或H28z-CAR-T细胞比较，H28ξ(YRHQ)-CAR-T细胞的STAT3磷酸化水平较H28ξ-CAR-T细胞明显升高（P<0.01）；而两者间PD-1和TIM-3的表达无明显差异。未经抗原刺激的CAR-T细胞CCR7和CD45RO表达与正常T细胞比较差异无统计学意义（均P>0.05），与SKOV3细胞共培养后，与T细胞或H28z-CAR-T细胞比较，H28ξ(YRHQ)-CAR-T细胞中 T EM 细胞比例明显增加、T CM 细胞比例明显减少（均P<0.05）。 结论： 在CD3胞内区引入YRHQ基序可在一定程度上提高CAR-T细胞的杀伤潜力。